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一種增強(qiáng)大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-12-24
  • 技術(shù)成熟度:可以量產(chǎn)
交易價(jià)格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào) CN201310074890.6 
  • 技術(shù)(專利)名稱 一種增強(qiáng)大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法 
  • 項(xiàng)目單位 江南大學(xué)
  • 發(fā)明人 劉雙平,石貴陽,張梁,丁重陽,何冬旭,李贏 
  • 行業(yè)類別 醫(yī)藥制造-原料藥
  • 技術(shù)成熟度 可以量產(chǎn)
  • 交易價(jià)格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 韓悅菲
  • 發(fā)布時(shí)間 2021-12-24  
  • 01

    項(xiàng)目簡(jiǎn)介

    本發(fā)明公開一種增強(qiáng)大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法,是將可同時(shí)過量表達(dá)酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶TyrB、甲基紫羅堿外轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白YddG、3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶AroG、分支酸變位酶和預(yù)苯酸脫水酶PheA、莽草酸激酶AroK以及莽草酸脫氫酶YdiB的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主大腸桿菌,并通過液體發(fā)酵生產(chǎn)L-苯丙氨酸,所述重組質(zhì)粒是將大腸桿菌來源的TyrB、YddG、AroG、PheA、AroK以及YdiB編碼基因進(jìn)行人工修飾以解除其所受代謝調(diào)控,并插入載體構(gòu)建而成。本發(fā)明可明顯增強(qiáng)大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌水平,L-苯丙氨酸產(chǎn)量高,有害副產(chǎn)物乙酸濃度低,發(fā)酵成本低廉,工藝簡(jiǎn)單,適宜產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種增強(qiáng)大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法,其特征在于:將可同時(shí)過量表達(dá)酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶TyrB、甲基紫羅堿外轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白YddG、3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶AroG、分支酸變位酶和預(yù)苯酸脫水酶PheA、莽草酸激酶AroK以及莽草酸脫氫酶YdiB的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主大腸桿菌,并通過液體發(fā)酵生產(chǎn)L-苯丙氨酸;所述液體發(fā)酵條件控制如下:發(fā)酵培養(yǎng)基的起始葡萄糖濃度為3~15g/L,發(fā)酵過程中的葡萄糖濃度為1~4g/L,發(fā)酵溫度35~42℃,發(fā)酵pH值6.5~7.5,通氣量0.5~1.0vvm,溶氧量為初始氧濃度的10~35%,發(fā)酵時(shí)間48~72h;????所述重組質(zhì)粒是將大腸桿菌來源的TyrB、YddG、AroG、PheA、AroK以及YdiB編碼基因進(jìn)行人工修飾以解除其所受代謝調(diào)控,并插入載體構(gòu)建而成;所述TyrB、YddG、AroG、PheA、AroK以及YdiB編碼基因的天然啟動(dòng)子被其它不受末端代謝產(chǎn)物反饋?zhàn)瓒舻膹?qiáng)啟動(dòng)子所替換,以增強(qiáng)其表達(dá)水平,所述強(qiáng)啟動(dòng)子包括PR-和/或PL啟動(dòng)子;所述TyrB編碼基因編碼框的起始?jí)A基序列被SEQ?ID?NO:1所示的堿基序列替換,以解除其與阻遏蛋白TyrR的結(jié)合能力;????所述AroG氨基酸序列中第146位的天門冬氨酸被替換成天門冬酰胺,以解除苯丙氨酸對(duì)其的反饋抑制;所述PheA的R-domain結(jié)構(gòu)域被刪除,以解除苯丙氨酸對(duì)其的反饋抑制。
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專利技術(shù)附圖

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