本發(fā)明公開一種增強(qiáng)大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法，是將可同時(shí)過量表達(dá)酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶TyrB、甲基紫羅堿外轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白YddG、3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶AroG、分支酸變位酶和預(yù)苯酸脫水酶PheA、莽草酸激酶AroK以及莽草酸脫氫酶YdiB的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主大腸桿菌，并通過液體發(fā)酵生產(chǎn)L-苯丙氨酸，所述重組質(zhì)粒是將大腸桿菌來源的TyrB、YddG、AroG、PheA、AroK以及YdiB編碼基因進(jìn)行人工修飾以解除其所受代謝調(diào)控，并插入載體構(gòu)建而成。本發(fā)明可明顯增強(qiáng)大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌水平，L-苯丙氨酸產(chǎn)量高，有害副產(chǎn)物乙酸濃度低，發(fā)酵成本低廉，工藝簡(jiǎn)單，適宜產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。

1.一種增強(qiáng)大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法，其特征在于：將可同時(shí)過量表達(dá)酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶TyrB、甲基紫羅堿外轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白YddG、3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶AroG、分支酸變位酶和預(yù)苯酸脫水酶PheA、莽草酸激酶AroK以及莽草酸脫氫酶YdiB的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主大腸桿菌，并通過液體發(fā)酵生產(chǎn)L-苯丙氨酸；所述液體發(fā)酵條件控制如下：發(fā)酵培養(yǎng)基的起始葡萄糖濃度為3~15g/L，發(fā)酵過程中的葡萄糖濃度為1~4g/L，發(fā)酵溫度35~42℃，發(fā)酵pH值6.5~7.5，通氣量0.5~1.0vvm，溶氧量為初始氧濃度的10~35%，發(fā)酵時(shí)間48~72h；????所述重組質(zhì)粒是將大腸桿菌來源的TyrB、YddG、AroG、PheA、AroK以及YdiB編碼基因進(jìn)行人工修飾以解除其所受代謝調(diào)控，并插入載體構(gòu)建而成；所述TyrB、YddG、AroG、PheA、AroK以及YdiB編碼基因的天然啟動(dòng)子被其它不受末端代謝產(chǎn)物反饋?zhàn)瓒舻膹?qiáng)啟動(dòng)子所替換，以增強(qiáng)其表達(dá)水平，所述強(qiáng)啟動(dòng)子包括P_R-和/或P_L啟動(dòng)子；所述TyrB編碼基因編碼框的起始?jí)A基序列被SEQ?ID?NO:1所示的堿基序列替換，以解除其與阻遏蛋白TyrR的結(jié)合能力；????所述AroG氨基酸序列中第146位的天門冬氨酸被替換成天門冬酰胺，以解除苯丙氨酸對(duì)其的反饋抑制；所述PheA的R-domain結(jié)構(gòu)域被刪除，以解除苯丙氨酸對(duì)其的反饋抑制。