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一種用于檢測脂肪酸濃度的方法及其中使用的基因工程大腸桿菌

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-10-18
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201410559415.2 
  • 技術(專利)名稱 一種用于檢測脂肪酸濃度的方法及其中使用的基因工程大腸桿菌 
  • 項目單位 南京大學
  • 發明人 陳熹,周榆,饒兵,朱瑞馳,朱毅,徐藝林,榮慧,秦榛,章秋浩,歐陽麗,徐春暉,楊展朝,陳昱達,朱琪璋,趙奕玲,溫玉琪 
  • 行業類別 智慧健康-其他
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 周功人
  • 發布時間 2021-10-18  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種用于檢測脂肪酸濃度的方法及其中使用的基因工程大腸桿菌。本發明通過構建大腸桿菌菌株中共表達由啟動子P驅動的RFP基因和啟動子P驅動的GFP基因的重組工程大腸桿菌菌株;將待檢測樣品加入所述的重組工程大腸桿菌發酵液中發酵培養,檢測紅色熒光和綠色熒光強度;根據紅色熒光和綠色熒光的強度確定樣品脂肪酸濃度。本發明中的重組菌株能夠高效地檢測脂肪酸,該檢測過程在溫和的條件下即可以進行,該方法為脂肪酸生物的快速檢測打下了堅實的基礎。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種生物檢測脂肪酸濃度的方法,其特征在于包括以下步驟:
    A)構建共表達由啟動子PFadD驅動的RFP基因和外源啟動子PFabB驅動的GFP基因的重組工
    程大腸桿菌菌株;所述的重組工程大腸桿菌菌株是將共表達質粒pSB1C3 R+G轉化到大腸桿
    菌DH5α所得;所述的共表達質粒pSB1C3 R+G是以pSB1C3為出發載體,在Xba I/Spe I酶切位
    點間依次插入啟動子PFadD、RFP基因、啟動子PFabB及GFP基因所得;
    B)將待檢測樣品加入所述的重組工程大腸桿菌發酵液中發酵培養,檢測紅色熒光和綠
    色熒光強度;
    C)根據紅色熒光和綠色熒光的強度確定樣品脂肪酸濃度。
    2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于所述啟動子PFadD來源于大腸桿菌,序列如SEQ
    ID NO.1所示;所述啟動子PFabB來源于大腸桿菌,序列如SEQ ID NO.2所示。
    3.根據權利要求1所述的方法,其特征在于步驟B)是將所述的重組工程大腸桿菌在30-
    37℃、400-800rpm、pH 6.5-7.5和溶氧20%以上的條件下培養至OD600為12-20,加入待檢測
    樣品,發酵2-4小時后檢測紅色熒光和綠色熒光強度。
    4.根據權利要求1所述的方法,其特征在于在激發光波長501nm,發射光波長511nm檢測
    綠色熒光;在激發光波長584nm,發射光波長607nm檢測紅色熒光。
    5.根據權利要求1所述的方法,其特征在于所述的方法還包括構建紅色熒光強度、綠色
    熒光強度與脂肪酸濃度的標準曲線;將待檢測樣品的紅色熒光強度、綠色熒光強度帶入標
    準熒光曲線,得出待檢測樣品所含的脂肪酸濃度。
    6.一種用于檢測脂肪酸含量的PFadD-RFP和PFabB-GFP共表達質粒,其特征在于所述的共
    表達質粒是以pSB1C3為出發載體,在Xba I /Spe I酶切位點間依次插入啟動子PFadD、RFP基
    因、啟動子PFabB及GFP基因所得。
    7.一種用于檢測脂肪酸含量的基因工程菌,其特征在于由權利要求6所述的共表達質
    粒轉染大腸桿菌所得。
    8.權利要求6所述的共表達質粒、權利要求7所述的基因工程菌在檢測脂肪酸濃度中的
    應用。
    展開

專利技術附圖

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