1.一種由大腸桿菌優勢密碼子組成的腸道病毒71衣殼蛋白1抗原，
即EV71-VP1抗原，其抗原基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。
2.制備如權利要求1所述抗原的基因片段的方法，其特征在于，
通過如下步驟獲得基因表達：
為相應基因序列命名，SEQ?ID?NO：2至5分別命名為EF4、EF3、
EF2、EF1；SEQ?ID?NO：6至9分別命名為ER1、ER2、ER3、ER4；
SEQ?ID?NO：10至13分別命名為FF4、FF3、FF2、FF1；SEQ?ID?
NO：14至17分別命名為FR1、FR2、FR3、FR4；SEQ?ID?NO：18至
21分別命名為GF4、GF3、GF2、GF1；SEQ?ID?NO：22至25分別命
名為GR1、GR2、GR3、GR4；SEQ?ID?NO：26至29分別命名為HF4、
HF3、HF2、HF1；SEQ?ID?NO：30至33分別命名為HR1、HR2、HR3、
HR4；
第1步：合成E、F、G、H基因片段；
合成E、F、G、H基因片段共需要4輪退火延伸PCR反應，第
一輪PCR反應體系為百泰克公司2×PCR反應液25μl、雙蒸水23μl、
XF1及XR1引物各1μl，期中X代表E、F、G、H，PCR反應條件
為94℃?1分鐘后，94℃?1分鐘，55℃?1分鐘，72℃?1分，5個循
環；后續第n輪PCR反應體系為百泰克公司2×PCR反應液25μl、
雙蒸水22μl、XFn及XRn引物各1μl，n-1輪PCR產物1μl，n代表
2，3，4；反應條件為PCR反應條件為94℃?3分鐘后，94℃?1分鐘，
55℃?1分鐘，72℃?1分鐘，30個循環后再72℃延伸5分鐘，即獲
得E、F、G、H四段基因；
第2步：EF基因片段和GH片段的PCR退火延伸合成；
EF基因片段拼接的PCR反應體系為百泰克公司2×PCR反應液
25μl、雙蒸水23μl、E基因及F基因各1μl，PCR反應條件為94℃?1
分鐘后，94℃?1分鐘，55℃?1分鐘，72℃?1分，5個循環；第二輪
PCR反應體系為百泰克公司2×PCR反應液25μl、雙蒸水22μl、引物
EF4及引物FR4基因各1μl，PCR反應條件為94℃?1分鐘后，94℃?1
分鐘，55℃?1分鐘，72℃?1分，5個循環；30個循環后再72℃延
伸5分鐘，即獲得EF基因片段；GH基因片段的拼接方法同EF，相
應E換成G，F換成H，即可獲得GH基因片段；
第3步：獲得EV71-VP1基因片段；
PCR反應體系為百泰克公司2×PCR反應液25μl、雙蒸水23μl、EF
基因及GH基因各1μl，PCR反應條件為94℃?1分鐘后，94℃?1分
鐘，55℃?1分鐘，72℃?1分，5個循環；第二輪PCR反應體系為百
泰克公司2×PCR反應液25μl、雙蒸水22μl、引物EF4及引物HR4
基因各1μl，PCR反應條件為94℃?1分鐘后，94℃?1分鐘，55℃?1
分鐘，72℃?1分，5個循環；30個循環后再72℃延伸5分鐘，即
獲得整個基因片段。
3.一種EV71抗體檢測試劑，其特征在于，使用如權利要求1所述
的EV71-VP1抗原制備。
4.一種EV71重組疫苗，其特征在于，使用如權利要求1所述的
EV71-VP1抗原制備。
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