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通過超量表達yerP基因提高枯草芽孢桿菌抗菌肽產量的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-07-28
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201110105395.8 
  • 技術(專利)名稱 通過超量表達yerP基因提高枯草芽孢桿菌抗菌肽產量的方法 
  • 項目單位 南京農業大學
  • 發明人 陸兆新,曹國強,呂鳳霞,別小妹,張充,鐘蕾 
  • 行業類別 醫藥制造-中藥飲片
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 韓愛平
  • 發布時間 2021-07-28  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及通過超量達基因提高枯草桿菌抗菌肽產量的方法,屬于生物技術領域。本方法首先以枯草芽孢桿菌ATCC9943為出發菌株,以大腸桿菌克隆載體pHCMC04為骨架構建一個基因超量表達載體pHCMC-YerP,通過電轉化將其轉入到枯草桿菌ATCC9943中使基因超量表達,構建了一個高產抗菌肽菌株FMB45。經過高效液相色譜分析,確定改良菌株產surfactin和fengycin的能力大大提高。
    展開
  • 02

    說明書

    1.獲得超量表達yerP基因菌株FMB?45的方法,其特征在于: (1)yerP基因超量表達載體pHCMC-YerP的構建 設計引物P43-F和P43-R,以枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)ATCC?9943基因組DNA為模板PCR擴增P43啟動子基因,獲得300?bp基因片段;設計引物YerP-F和YerP-R,以枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)ATCC?9943基因組DNA為模板PCR擴增YerP基因表達框,獲得3195?bp基因片段;擴增得到的兩個基因分別克隆至pMD19-T載體,轉化大腸桿菌(Escherichia?coli)DH5a,經驗證、測序正確后,分別命名為pP43-T、pYerP-T,于-20℃條件下保存備用; 名稱 序列 酶切位點 YerP-F 5’GCGGGATCCATGACCAGTCAGTCAATAAAAAATG3’ BamHI YerP-R 5’CGGCCCGGGTTACTCTTCTTCCGTTCCCGG3’ SmaI P43-F 5’CGCGAGCTCTGATAGGTGGTATGTTTTCGC3’ SacI P43-R 5’GCGGGATCCCATGTGTACATTCCTCTCTT3’ BamHI
    pP43-T用BamHI/SacI雙酶切后獲得P43啟動子基因片段,與經過相同雙酶切處理的pHCMC04載體,用T4DNA連接酶連接,構建pHCMC-P43載體,酶切驗證正確后于-20℃條件下保存備用;pYerP-T用BamH/SmaI雙酶切后獲得YerP片段,與經過相同雙酶切處理的pHCMC-P43載體,用T4?DNA連接酶連接,構建pHCMC-YerP載體,酶切驗證正確后,轉化大腸桿菌DH5a,用于下一步轉化; (2)FMB45菌株的構建 以枯草芽孢桿菌ATCC?9943制備感受態細胞,采用電轉化方法,將獲得的yerP基因超量表達載體pHCMC-YerP轉化入枯草芽孢桿菌ATCC?9943,氯霉素平板上篩選得到氯霉素抗性菌株,命名為FMB?45;質粒pHCMC-YerP在枯草桿菌ATCC?9943中過量表達yerP基因,使菌株FMB?45成為超量表達yerP基因的突變菌株,即為所得到的菌株。2.權利要求1所述方法獲得的超量表達yerP基因菌株FMB?45。3、權利要求2所述超量表達yerP基因菌株FMB?45在生產枯草芽孢桿菌抗菌肽中的應用。
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