本發(fā)明提供了一種固氮基因簇，包含nifB，nifH，nifD，nifK，nifE，nifN，nifX，moeB，nifV9個(gè)基因，是目前發(fā)現(xiàn)的較小的能夠完成固氮功能的基因簇。本發(fā)明還提供了含有上述固氮基因簇基因的表達(dá)載體及含有該載體的基因工程菌，本發(fā)明的固氮基因簇可以在大腸桿菌中完成固氮過(guò)程，得到的基因工程菌具有較高的固氮能力，且能夠解除銨氧對(duì)固氮影響。本發(fā)明提供的固氮基因簇可用于制備轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物，提高農(nóng)作物的生物固氮能力。

1.一株類(lèi)芽孢桿菌(Paenibacillus?sp.)18WLY，其保藏編號(hào)為
CGMCC?No.7724。
2.如權(quán)利要求1所述的類(lèi)芽孢桿菌(Paenibacillus?sp.)18WLY，
其特征在于，含有一種固氮基因簇，其為nifBHDKENXV?moeB。
3.一種固氮基因簇，其為nifBHDKENXV?moeB，其核苷酸序列
為：
SEQ?ID?NO.10所示，包含nifB，nifH，nifD，nifK，nifE，nifN，
nifX，moeB，nifV9個(gè)基因，其核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.1-9所
示。
4.含有權(quán)利要求3所述固氮基因簇的表達(dá)載體。
5.如權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體，其特征在于，其為
pHY300PLK-2。
6.含有權(quán)利要求4-5任一所述表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的宿主細(xì)胞，其特征在于：所述宿主細(xì)
胞為宿主菌。
8.如權(quán)利要求7所述的宿主細(xì)胞，其特征在于：所述宿主菌為
大腸桿菌基因工程菌株78-7，其通過(guò)如下方法構(gòu)建得到：
(1)以S1和S2為引物，固氮芽孢桿菌Paenibacillus?sp.18WLY
基因組為模板，PCR擴(kuò)增帶有自身啟動(dòng)子的固氮基因簇
nifBHDKENXV?moeB目的片段；所述S1的序列為：
GCTCTAGAGCGGAGACTATTTCCCAAAAT；S2序列為
TGCGGATCCGCGTGTAATGGTTATATGAAT；
(2)將表達(dá)載體pHY300PLK和步驟(1)的目的片段分別用
XbaI和BamHI分別雙酶切，回收酶切產(chǎn)物；
(3)在10μl反應(yīng)體系中分別加入酶切后的表達(dá)載體pHY300PLK
1μl和7.5μl目的片段，摩爾比約為1:6，10×ligase?buffer1μl，T4DNA?
ligase0.5μl，混勻；16℃水浴連接16h，轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞；
(4)篩選陽(yáng)性克隆子，得到含有固氮基因簇nifBHDKENXVmoeB
的質(zhì)粒pHY300PLK-2；
(5)將含有固氮基因簇nifBHDKENXVmoeB的質(zhì)粒
pHY300PLK-2電轉(zhuǎn)到E.coli?JM109中，得到工程菌株78-7。
9.大腸桿菌基因工程菌株78-7在制備生物固氮微生物菌劑或生
物有機(jī)肥中的應(yīng)用。
10.含有權(quán)利要求1所述的類(lèi)芽孢桿菌18WLY的菌劑。
11.權(quán)利要求1所述的類(lèi)芽孢桿菌18WLY或權(quán)利要求3所述的
固氮基因簇在生物固氮中的用途。