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一種固氮基因簇及其應(yīng)用

  • 專(zhuān)利類(lèi)型:發(fā)明專(zhuān)利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-12-16
  • 技術(shù)成熟度:已有樣品
交易價(jià)格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過(guò)戶(hù)
  • 交易成功

專(zhuān)利推薦

  • 技術(shù)(專(zhuān)利)類(lèi)型 發(fā)明專(zhuān)利
  • 申請(qǐng)?zhí)?專(zhuān)利號(hào) CN201310317366.7 
  • 技術(shù)(專(zhuān)利)名稱(chēng) 一種固氮基因簇及其應(yīng)用 
  • 項(xiàng)目單位 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
  • 發(fā)明人 陳三鳳,王莉瑛 
  • 行業(yè)類(lèi)別 智慧健康-其他
  • 技術(shù)成熟度 已有樣品
  • 交易價(jià)格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 周鈺葳
  • 發(fā)布時(shí)間 2021-12-16  
  • 01

    項(xiàng)目簡(jiǎn)介

    本發(fā)明提供了一種固氮基因簇,包含nifB,nifH,nifD,nifK,nifE,nifN,nifX,moeB,nifV9個(gè)基因,是目前發(fā)現(xiàn)的較小的能夠完成固氮功能的基因簇。本發(fā)明還提供了含有上述固氮基因簇基因的表達(dá)載體及含有該載體的基因工程菌,本發(fā)明的固氮基因簇可以在大腸桿菌中完成固氮過(guò)程,得到的基因工程菌具有較高的固氮能力,且能夠解除銨氧對(duì)固氮影響。本發(fā)明提供的固氮基因簇可用于制備轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物,提高農(nóng)作物的生物固氮能力。
    展開(kāi)
  • 02

    說(shuō)明書(shū)

    1.一株類(lèi)芽孢桿菌(Paenibacillus?sp.)18WLY,其保藏編號(hào)為
    CGMCC?No.7724。
    2.如權(quán)利要求1所述的類(lèi)芽孢桿菌(Paenibacillus?sp.)18WLY,
    其特征在于,含有一種固氮基因簇,其為nifBHDKENXV?moeB。
    3.一種固氮基因簇,其為nifBHDKENXV?moeB,其核苷酸序列
    為:
    SEQ?ID?NO.10所示,包含nifB,nifH,nifD,nifK,nifE,nifN,
    nifX,moeB,nifV9個(gè)基因,其核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.1-9所
    示。
    4.含有權(quán)利要求3所述固氮基因簇的表達(dá)載體。
    5.如權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體,其特征在于,其為
    pHY300PLK-2。
    6.含有權(quán)利要求4-5任一所述表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。
    7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的宿主細(xì)胞,其特征在于:所述宿主細(xì)
    胞為宿主菌。
    8.如權(quán)利要求7所述的宿主細(xì)胞,其特征在于:所述宿主菌為
    大腸桿菌基因工程菌株78-7,其通過(guò)如下方法構(gòu)建得到:
    (1)以S1和S2為引物,固氮芽孢桿菌Paenibacillus?sp.18WLY
    基因組為模板,PCR擴(kuò)增帶有自身啟動(dòng)子的固氮基因簇
    nifBHDKENXV?moeB目的片段;所述S1的序列為:
    GCTCTAGAGCGGAGACTATTTCCCAAAAT;S2序列為
    TGCGGATCCGCGTGTAATGGTTATATGAAT;
    (2)將表達(dá)載體pHY300PLK和步驟(1)的目的片段分別用
    XbaI和BamHI分別雙酶切,回收酶切產(chǎn)物;
    (3)在10μl反應(yīng)體系中分別加入酶切后的表達(dá)載體pHY300PLK
    1μl和7.5μl目的片段,摩爾比約為1:6,10×ligase?buffer1μl,T4DNA?
    ligase0.5μl,混勻;16℃水浴連接16h,轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞;
    (4)篩選陽(yáng)性克隆子,得到含有固氮基因簇nifBHDKENXVmoeB
    的質(zhì)粒pHY300PLK-2;
    (5)將含有固氮基因簇nifBHDKENXVmoeB的質(zhì)粒
    pHY300PLK-2電轉(zhuǎn)到E.coli?JM109中,得到工程菌株78-7。
    9.大腸桿菌基因工程菌株78-7在制備生物固氮微生物菌劑或生
    物有機(jī)肥中的應(yīng)用。
    10.含有權(quán)利要求1所述的類(lèi)芽孢桿菌18WLY的菌劑。
    11.權(quán)利要求1所述的類(lèi)芽孢桿菌18WLY或權(quán)利要求3所述的
    固氮基因簇在生物固氮中的用途。
    展開(kāi)

專(zhuān)利技術(shù)附圖

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    專(zhuān)利證書(shū)

    專(zhuān)利利登記簿副本

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  • 品類(lèi)齊全

    海量資源庫(kù),平臺(tái)整合幾十萬(wàn)閑置資源。
  • 交易保障

    完善的資金保障體系確保買(mǎi)賣(mài)雙方資金安全。
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