1.鴨瘟病毒轉移載體pUC-ΔgC-EGFP的制備方法，其特征在于由以下步驟完
成：
1)用Xho?I和BamH?I雙酶切pEGFP-C1，末端補平后，平末端連結，再通過PCR
方法擴增出包含CMV啟動子、EGFP和SV40polyA的片段共1315bp片段，克隆進載體
pMD19-T，構建pMD-EGFP，其中含CMV啟動子和SV40polyA的EGFP表達盒；
2)以鴨瘟病毒CHv株為材料，通過PCR方法將UL44基因的左端1178bp片段和
右側1421bp片段擴增出來，克隆進載體pMD19-T，構建質粒pMD-gCL和pMD-gCR，
分別包含UL44基因的左側1178bp片段和右側1421bp片段；
3)先將pMD-gCL用Hind?III和XbaI酶切，回收1178bp片段，克隆進已用相應酶
酶切的pUC19載體，然后再將pMD-gCR中的UL44右側片段以BamH?I和EcoR?I插入
到已含有UL44左側片段的pUC-gCL載體中，獲得載體pUC-ΔgC，在該載體的Xba?I
和BamH?I之間連接含CMV啟動子和SV40polyA的EGFP表達盒，獲得含有報告基因
的轉移載體pUC-ΔgC-EGFP；
上述擴增UL44基因的左側1178bp片段的上、下游引物分別是：
gCLF：5′-TTGCCCAAGCTTGGGACAAGAACGGAGGTCAAGAC-3′
gCLR：5′-CTAGCTCTAGAGCGATATAGAATCGTTAAGTATT-3′
上述擴增UL44基因的右側1421bp片段的上、下游引物分別是：
gCRF：5′-ATACGGGATCCCGTGGCCGTTTGTTTCTATTAT-3′
gCRR：5′-ATCGGAATTCCATACACGGATTAGCCAGA-3′
上述擴增EGFP1315bp片段的上、下游引物分別是：
GFPF：5′-TACCGGGATCCCGTAGTTATTAATAGTAATCAATIACG-3′
GFPR：5′-AACGCTCTAGAGCATGCAGTGAAAAAAATGCT-3′。
2.根據權利要求1所述方法構建的鴨瘟病毒轉移載體pUC-ΔgC-EGFP，含所
述轉移載體pUC-ΔgC-EGFP的大腸桿菌種(Escherichiacoli)DH5α于2011年11月30
日保藏于位于中國武漢大學的中國典型培養物保藏中心，其保藏號為CCTCC?NO：
M2011432。
3.鴨瘟病毒gC缺失重組株DPV-ΔgC-EGFP的制備方法，其特征在于由以下步
驟完成：
1)鴨瘟病毒Chv株感染原代鴨胚成纖維細胞；
2)根據權利要求1所述的方法制備的轉移載體pUC-ΔgC-EGFP轉染步驟1)所述的經
鴨瘟病毒Chv株感染過的原代鴨胚成纖維細胞；
3)收獲經步驟2)轉染后出現綠色熒光的原代鴨胚成纖維細胞，反復凍融后接種原代鴨
胚成纖維細胞；
4)待步驟3)中接種后的原代鴨胚成纖維細胞出現綠色熒光后，將出現熒光的細胞覆蓋
營養瓊脂；
5)挑出含熒光斑細胞，反復凍融；
6)將反復凍融后的含熒光斑細胞按不同濃度稀釋后接種鴨胚成纖維細胞，孵育2h后，
吸去上清，覆蓋營養瓊脂；
7)重復步驟5)和步驟6)至獲得純化的含EGFP基因的重組鴨瘟病毒DPV-ΔgC-EGFP。
4.根據權利要求3所述方法構建的鴨瘟病毒gC缺失重組株DPV-ΔgC-EGFP，
其于2011年11月30日保藏于位于中國武漢大學的中國典型培養物保藏中心，其保藏
號為CCTCC?NO：V201137。
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