1.一種高溫角質酶，其氨基酸序列為SEQ?ID?NO：2所示。2.一種編碼權利要求1所述的高溫角質酶的基因，其核苷酸序列為SEQ?IDNO：1所示。3.一種如權利要求2所述的高溫角質酶基因的表達方法，其特征是由嗜熱子囊菌(Thermobifida?fusca)WSH03-11總DNA獲得高溫角質酶基因SEQ?IDNO：1，角質酶基因以質粒pET20b(+)為表達載體，以大腸桿菌(E.coli)BL21Rosetta(DE3)PlysS為表達宿主，實現高溫角質酶基因的高效表達；(1)嗜熱子囊菌WSH03-11總DNA的提取：嗜熱子囊菌WSH03-11菌株在LB液體培養基中培養2天，10000rpm離心收集菌體，無菌水洗滌，收集沉淀懸浮于500μL?Tris-EDTA緩沖液，加入15μL溶菌酶，37℃下保溫30min，再加入5μL?RNA酶，37℃下保溫30min，加入30μL10％十二烷基硫酸鈉和15μL蛋白酶K，37℃下保溫60min，加入100μL?5M的NaCl和80μL十六烷基三甲基溴化銨，65℃下保溫20min，用700μL的酚∶氯仿∶異戊醇體積比25∶24∶1混合溶劑抽提，10000rpm離心，上清液用700μL的氯仿∶異戊醇體積比24∶1抽提，10000rpm離心，上清液用1400μL的冰異戊醇混合，-20℃沉淀30min，10000rpm離心，沉淀加200μL?70％乙醇清洗，10000rpm離心，沉淀用Tris-EDTA緩沖液溶解，即為嗜熱子囊菌WSH03-11總DNA；(2)高溫角質酶編碼基因的克隆：以嗜熱子囊菌WSH03-11總DNA為模版，以下列核苷酸序列作為引物，下劃線為酶切位點Nco?I和EcoR?I，PCR擴增高溫角質酶基因；引物1：5’-ggAATACCATATgTCCATggCCAACCCCTACgAgCgCgg-3’引物2：5’-CATCTCgAgAgAATTCgggAACgggCAggTggAgCg-3’PCR反應在50μL體系中進行，反應條件為在95℃變性5min后開始循環，然后95℃變性1min，55℃退火1min，72℃延伸1min，共35個循環后，再于72℃延伸10min，擴增得到780bp的PCR片段，割膠回收，回收片斷與pMD18-Tsimple載體連接，連接產物轉化大腸桿菌(E.coli)JM109，轉化產物涂布含100mg/L氨芐青霉素的LB平板，經37℃培養過夜，挑選菌落，接入LB液體培養基，10h后提取質粒，命名為CUT-pMD18-T?simple，將此質粒進行序列測定；(3)高溫角質酶基因的改造：以CUT-pMD18-T?simple為模板進行定點突變PCR，設計引物：引物3：5’-CATgggCCACTCAATgggCggCggCggC-3’引物4：5’-gCCgCCgCCgCCCATTgAgTggCCCATg-3’PCR反應在50μL體系中進行，反應條件為在95℃變性5min后開始循環，然后95℃變性1min，55℃退火1min，72℃延伸4min，共35個循環后，再于72℃延伸10min，將PCR產物轉化大腸桿菌JM109感受態細胞，轉化后的菌體涂布100mg/L氨芐青霉素LB平板，挑選單菌落接入100mg/L氨芐青霉素LB液體培養基經37℃過夜培養，抽提質粒，將突變后的質粒進行序列測定；(4)高溫角質酶基因在表達載體上的構建：用于構建表達載體的質粒是pET20b(+)，帶有pelB信號肽和His-tag標記，將pET20b(+)質粒和角質酶基因進行Nco?I和EcoR?I雙酶切，酶切產物割膠回收后，再用T4連接酶16℃連接過夜，連接產物轉化大腸桿菌JM109感受態細胞，經37℃培養過夜，挑選轉化子于100mg/L氨芐青霉素LB進行液體培養，然后抽提質粒，得到富集的CUT-pET20b(+)質粒；(5)大腸桿菌宿主轉化和篩選重組菌：將質粒CUT-pET20b(+)熱擊轉化大腸桿菌BL21?Rosetta(DE3)PlysS宿主菌，再在含100mg/L氨芐青霉素和50mg/L氯霉素的LB平板上經37℃培養過夜，挑選重組菌CUT-pET20b(+)/大腸桿菌BL21?Rosetta(DE3)PlysS轉化子在TB培養基中37℃液體培養過夜，后接入TB發酵液體培養基37℃培養至OD達1.5后用終濃度4μM異丙基硫代βD半乳糖苷誘導，降溫至24℃培養，64h時產酶達69U/mL；(6)重組高溫角質酶的純化和特性：將上述角質酶發酵液于4℃、10000rpm離心20min除菌體；上清液中加入70％固體硫酸銨鹽析過夜，4℃、10000rpm離心20min，取沉淀物用適量含20mM磷酸鈉、0.5M氯化鈉、20mM咪唑、pH?7.4的緩沖液A溶解，并在緩沖液A中透析過夜后，通過0.22μm膜過濾后制成上樣樣品；Ni親和柱用緩沖液A平衡后，將上樣樣品吸入Ni柱，使之完全吸附后，分別用緩沖液A～含480mM咪唑的緩沖液A梯度洗脫，流速1mL/min，檢測波長為280nm，分部收集含角質酶酶活的洗脫液；活力組分用10000道爾頓膜離心濃縮，得純化角質酶酶制品。
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