1.一種乳酸乳球菌表達載體，其特征在于：包含有如SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列；其含有乳酸乳球菌Usp45蛋白的信號肽基因SPusp45，SPusp45基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.2所示，通過在所述表達載體中插入外源基因，并將載體轉入乳酸乳球菌，可使SPusp45基因與外源基因在乳酸乳球菌中融合表達，進而實現外源蛋白在乳酸乳球菌中的分泌表達；擴增SPusp45基因的上游引物序列為SEQ?ID?NO.4所示，下游引物序列為SEQ?ID?NO.5所示；擴增SPusp45基因的PCR循環條件：預變性94℃5min，94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，30個循環，最后72℃延伸5min。?2.一種如權利要求1所述乳酸乳球菌表達載體的構建方法，其特征在于：其包括以下步驟：?(1)以L.lactis?NZ3900菌株基因組DNA為模板，PCR擴增得到SPusp45基因；?(2)SPusp45基因與表達載體pNZ8149經雙酶切和回收后，進行定向連接；?(3)將連接產物用于電轉化L.lactis?NZ3900菌株感受態細胞；?(4)采用Elliker選擇培養基篩選陽性轉化菌；?(5)培養陽性轉化菌，提取質粒，進行酶切和測序鑒定，得到乳酸乳球菌表達載體，并將其命名為pNZ8149-SPusp45。?3.一種如權利要求1所述乳酸乳球菌表達載體作為外源蛋白表達載體的應用。?4.根據權利要求3所述乳酸乳球菌表達載體作為外源蛋白表達載體的應用，其特征在于：所述外源蛋白的編碼基因是幽門螺桿菌(Helicobacter?pylori)尿素酶B亞基(UreB)的編碼基因，基因序列為SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列。?5.一種如權利要求1所述的乳酸乳球菌表達載體在構建能夠在乳酸乳球菌中分泌表達幽門螺桿菌尿素酶B亞基(UreB)的載體中的應用，所述能夠在乳酸乳球菌中分泌表達幽門螺桿菌尿素酶B亞基(UreB)的載體的核苷酸序列是SEQ?ID?NO.9所示的核苷酸序列，被命名為pNZ8149-SPusp45-ureB。?6.一種重組乳酸乳球菌(Lactococcus?lactis)NZ3900/pNZ8149-SPusp45-ureB，其保藏編號為CGMCC?No.6117；其中，擴增SPusp45基因的上游引物序列為SEQ?ID?NO.4所示，下游引物序列為SEQ?ID?NO.5所示。?7.一種如權利要求6所述的重組乳酸乳球菌在制備抗幽門螺桿菌疫苗以及制備幽門螺桿菌感染診斷試劑的應用。?8.一種如權利要求6所述的重組乳酸乳球菌作為發酵菌株在食品加工方面的應用。?
展開
