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優化的動物蛋白基因OCX-36及其原核表達載體的構建

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-02-05
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201710371930.1 
  • 技術(專利)名稱 優化的動物蛋白基因OCX-36及其原核表達載體的構建 
  • 項目單位 華中農業大學
  • 發明人 馬美湖,張茂杰,李述剛,黃群,金永國,付星 
  • 行業類別 醫藥制造-衛生用品
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 尤蘭欣
  • 發布時間 2022-02-05  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種優化的動物蛋白基因OCX?36及其原核表達載體的構建方法和應用,采取的技術方案是對OCX?36基因稀有密碼子進行改造優化,并切除了信號肽,將優化的OCX?36基因與載體連接,構建重組質粒pMD?19T?OCX?36,轉入到大腸桿菌C41(DE3)感受態細胞中,篩選陽性克隆進行培養、蛋白表達,菌體細胞超聲破碎、離心、收集上清液經一次鎳柱親和層析即可獲得蛋白rOCX?36。本發明通過對OCX?36基因序列的優化,實現了蛋白rOCX?36的可溶性表達,解決了其難于原核表達的技術問題,表達蛋白對患有結腸炎的小鼠具有明顯改善病情的效果,顯示rOCX?36可用于制備治療結腸炎的藥物。
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  • 02

    說明書

    1.一種優化的動物蛋白基因OCX-36,其特征在于:它的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一種權利要求1所述基因OCX-36編碼的蛋白Ovocalyxin-36,其特征在于:它的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.一種重組表達載體,其特征在于:它含有權利要求1所述優化的動物蛋白基因OCX-36的表達載體。4.根據權利要求3所述重組表達載體,其特征在于:所述表達載體為pET28b(+)。5.根據權利要求4所述重組表達載體,其特征在于:所述優化的動物蛋白基因OCX-36插入表達載體pET28b(+)的酶切位點BamHⅠ和EcoRⅠ之間。6.含有權利要求3~5中任意一項所述重組表達載體的宿主細胞,其特征在于:所述宿主細胞為大腸桿菌BL21(DE3)感受態細胞。7.一種權利要求3~5中任意一項所述重組表達載體的構建方法,其特征在于:包括以下步驟:1)對OCX-36編碼基因進行分析,根據大腸桿菌的密碼子偏好性,對OCX-36基因進行稀有密碼子替換,并調整密碼子適應指數,同時切除了21個氨基酸長度的信號肽;得到優化的動物蛋白基因OCX-36,其核苷酸序列如核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;2)根據優化的動物蛋白基因OCX-36序列設計特異性引物對,該引物對分別加入保護堿基和相應的限制酶切位點,引物序列分別為:F- BamHⅠ:CGGGATCCATGAAGCCGCTGAAGCTTTT;R- EcoRⅠ: CGGAATTCTCACACGGAGATCGCCAACA;3)以優化的動物蛋白基因OCX-36的序列為模板,進行PCR,得到PCR產物;4)將PCR產物連接到質粒pMD-19T上,得到質粒pMD-19T-OCX-36,5)BamHⅠ和EcoRⅠ分別對pMD-19T-OCX-36和pET28b(+)進行雙酶切,回收得到酶切化的OCX-36和線性化的pET28b(+);6)將酶切化的OCX-36和線性化的pET28b(+)用T4連接酶4℃連接過夜,得到連接產物;7)將連接產物轉化大腸桿菌BL21(DE3)感受態細胞,異丙基硫代-β-D-半乳糖苷IPTG誘導表達;篩選驗證,獲得重組表達載體和含有重組表達載體的宿主細胞。8.一種含有重組表達載體的宿主細胞制備蛋白Ovocalyxin-36的方法,其特征在于:包括以下步驟:1)將權利要求7所述的步驟6)得到連接產物轉化大腸桿菌BL21(DE3)的感受態細胞;誘導表達;2)取誘導表達的菌液,加入PBS緩沖液,離心,超聲破碎后離心,保留上清液;5)上清液上樣至親和層析柱,洗脫得到蛋白Ovocalyxin-36,即為蛋白rOCX-36。9.一種利用權利要求8制備得到的蛋白Ovocalyxin-36在制備抗炎的藥品中的應用。10.根據權利要求9所述的應用,其特征在于:所述蛋白Ovocalyxin-36在制備抗結腸炎的藥品中的應用。
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