本發明涉及一種人GM-CSF基因與結核分枝桿菌CFP10基因和ESAT6基因嵌合表達GMCSF-CFP10-ESAT6蛋白重組卡介苗的構建及其免疫原性研究，即利用基因工程技術將人GM-CSF基因和結核分枝桿菌CFP10基因和ESAT6基因序列插入到同一大腸桿菌-結核分枝桿菌穿梭質粒pMV361的序列中，構建重組穿梭質粒rpMV361GMCSF-CFP10-ESAT6。然后采用電穿孔的方法將上述載體導入卡介苗，構建重組卡介苗rBCG：GMCSF-CFP10-ESAT6。本發明構建的重組卡介苗可以穩定的表達GMCSF-CFP10-ESAT6嵌合蛋白，其免疫原性優于傳統卡介苗。本發明提供了一種重組卡介苗的制備過程，并研究了其免疫性，屬于基因工程領域和結核疫苗領域。本發明將更有效的預防結核病的發生及傳播。

1.一種重組卡介苗rBCG：GMCSF-CFP10-ESAT6，其特征在于，將GMCSF-CFP10-ESAT6嵌合
基因重組入卡介苗。
2.如權利要求1所述的重組卡介苗的制備方法，其特征在于，該方法包括以下幾個步驟：
(1)hGM-CSF基因的擴增、結核分枝桿菌CFP10基因和ESAT6基因的擴增；
(2)CFP10-ESAT6融合基因的擴增；
(3)GMCSF-CFP10-ESAT6嵌合基因的擴增；
(4)將GMCSF-CFP10-ESAT6嵌合基因插入至大腸桿菌-結核分枝桿菌穿梭質粒pMV361中，構
建rpMV361GMCSF-CFP10-ESAT6；
(5)將(4)中的重組質粒電轉化入卡介苗；
(6)用卡那霉素進行篩選；
(7)提取基因組，擴增GMCSF-CFP10-ESAT6嵌合基因；
(8)熱誘導后收集細菌蛋白，Western-blot鑒定GMCSF-CFP10-ESAT6嵌合蛋白的表達。
3.一種重組質粒的制備方法，其特征在于，將人粒-巨噬細胞集落刺激因子(hGM-CSF)序列和結
核分枝桿菌CFP10基因和ESAT6基因序列共同插入大腸桿菌-結核分枝桿菌穿梭質粒序列中。