本發明公開了一種來源于唐菖蒲伯克霍爾德氏菌(Burkholderia gladioli)ZJB?12126的重組羰基還原酶及其編碼基因、含有該基因的重組載體、該重組載體轉化得到的重組基因工程菌，以及其在不對稱還原前手性羰基化合物中的應用；分別以2?苯甲酰氨甲基?3?酮丁酸酯、4?氯乙酰乙酸乙酯(COBE)、(R)?6?氰基?5?羥基?3?羰基己酸叔丁酯和(4S)?3?[5?(4?氟苯基)?1,5?二氧代戊基]?4?苯基?2?惡唑烷酮為底物，進行生物催化反應制備高光學純度的(2S,3R)?2?苯甲酰氨甲基?3?羥基丁酸酯、(S)?4?氯?3?羥基丁酸乙酯、6?氰基?(3R,5R)?二羥基己酸叔丁酯以及(4S)?3?[(5S)?5?(4?氟苯基)?5?羥基戊酰基]?4?苯基?1,3?氧氮雜環戊烷?2?酮，可以利用重組大腸桿菌作為生物催化劑進行生物催化反應，為藥物手性中間體的生物催化合成提供了可供選擇的新酶源。

1.一種重組羰基還原酶在制備不對稱還原前手性羰基化合物中的應用，其特征在于所
述應用為：以含來源于唐菖蒲伯克霍爾德氏菌（Burkholderia gladioli）ZJB-12126的重組
羰基還原酶基因的工程菌經發酵培養獲得的濕菌體為催化劑，于pH值為6~10的緩沖液中，
加入底物，輔助底物和NAD(P)⁺，在20~40 ℃、50~250 rpm條件下反應，反應完全后，獲得含
手性醇的混合液；所述底物為 (4S)-3-[5-(4-氟苯基)-1,5-二氧代戊基]-4-苯基-2-惡唑
烷酮，所述輔助底物為葡萄糖、甲酸銨、異丙醇或無水乙醇，當所述輔助底物為葡萄糖時，添
加葡萄糖脫氫酶構成輔助底物體系，當所述輔助底物為甲酸銨時，添加甲酸銨脫氫酶構成
輔助底物體系；所述催化劑的用量以濕菌體的重量計為20~200 g/L緩沖液，所述底物的初
始濃度為10~100 mmol/L緩沖液，所述輔助底物的用量為10~200 g/L緩沖液，所述葡萄糖脫
氫酶或甲酸銨脫氫酶的用量以含葡萄糖脫氫酶或甲酸銨脫氫酶的菌體經發酵培養獲得的
濕菌體重量計為20~200 g/L緩沖液，所述NAD(P)⁺的用量為0.01~5 mmol/L緩沖液；所述重
組羰基還原酶的氨基酸序列為SEQ ID NO：2所示。
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述濕菌體按如下方法制備：將含有重組羰基
還原酶基因的工程菌接種至含有終濃度50 μg/ml卡那霉素抗性的LB液體培養基，37 ℃，
200 rpm下培養12 h，再以體積濃度1%接種量接種至新鮮的含有終濃度50 μg/ml卡那霉素
抗性的LB液體培養基中，于37 ℃，150 rpm下培養至菌體OD₆₀₀達0.6-0.8，加入終濃度為0.1
mM的IPTG，28 ℃下誘導培養12 h后，4 ℃、5000 rpm離心5 min，棄去上清液，收集濕菌體。
3.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述的應用以含重組羰基還原酶基因的工程
菌經發酵培養獲得的濕菌體為催化劑，于pH值為6~10的緩沖液中，加入底物，葡萄糖、葡萄
糖脫氫酶和NAD(P)⁺，在30 ℃、150 rpm條件下反應，反應完全后，獲得含手性醇的混合液；
所述底物為(4S)-3-[5-(4-氟苯基)-1,5-二氧代戊基]-4-苯基-2-惡唑烷酮，所述催化劑的
用量以濕菌體的重量計為50 g/L緩沖液，所述底物的初始濃度為20 mmol/L緩沖液，所述葡
萄糖的用量為50 g/L緩沖液，所述葡萄糖脫氫酶的用量以含葡萄糖脫氫酶的菌體經發酵培
養獲得的濕菌體重量計，為50 g/L緩沖液，所述NAD(P)⁺的用量為2 mmol/L緩沖液。