本發明屬于基因工程及醫學檢驗領域，涉及一種檢測幽門螺桿菌克拉霉素耐藥基因的生物芯片及其制備方法和應用。該芯片是通過下列方法制備得到的：芯片片基經過醛基化處理；探針的5′端連接poly(dT)的分子臂；探針的5′端再進行氨基修飾；探針針對幽門螺桿菌23S rRNA基因的下列位置的突變：A2115G、A2142G、A2142C、A2143G、A2143C、T2182C、G2224A；將探針固定在芯片片基。該芯片具有靈敏度高、特異性好；可分辨單堿基的差別，該芯片檢測成本低，適于基層單位推廣使用。

1.一種用于酶顯色法檢測幽門螺桿菌克拉霉素耐藥基因的生物芯片，其特征在于該生物芯片是通過下列方法制備得到的：a、芯片片基經過醛基化處理；b、探針的5′端連接poly(dT)₁₀的分子臂；c、探針的5′端再進行氨基修飾；d、探針是針對幽門螺桿菌23S?rRNA基因的下列位置的突變：A2115G、A2142G、A2142C、A2143G、A2143C、T2182C、G2224A；e、將探針固定在芯片片基；其中：所述的探針如下表所示： 。2.根據權利要求1所述的生物芯片，其特征在于步驟e中將探針固定于芯片片基的方法包括下列步驟：a、用去離子水將合成的探針稀釋成300pmol/μl，取10μl點樣液和10μl探針稀釋液混合后置于96孔微孔板；點樣液組成為750mmol/L?NaCl，75mmol/L乙酸鈉，5％甘油，1％聚蔗糖和0.1％?SDS；b、利用微陣列芯片點樣儀進行點樣；c、點樣時保持室內溫度為28℃，相對濕度為70％，點樣后的芯片在室溫放置48小時后再進行步驟d；?d、室溫下將點樣后的芯片浸入0.2％的SDS中漂洗數分鐘，再放入去離子水中洗數分鐘，再浸入0.2％的SDS中洗3次，每次1分鐘，再浸入100℃去離子水中5秒鐘，干后備用。3.權利要求1所述的生物芯片的制備方法，其特征在于包括下列步驟：a、芯片片基經過醛基化處理；b、探針的5′端連接poly(dT)₁₀的分子臂；c、探針的5′端再進行氨基修飾；d、探針是針對幽門螺桿菌23S?rRNA基因的下列位置的突變：A2115G、A2142G、A2142C、A2143G、A2143C、T2182C、G2224A；e、將探針固定在芯片片基。4.權利要求1所述的生物芯片在檢測幽門螺桿菌克拉霉素耐藥中的應用。5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于該生物芯片的使用方法如下：1)、樣品處理：取胃粘膜組織抽提基因組DNA作為模板；2)、PCR擴增：a.地高辛標記引物：根據23S?rRNA突變位點設計引物，用地高辛標記上游引物；所說的引物是：上游引物：5′-ATGAATGGCGTAACGAGATGGGAGC-3′，下游引物：5′-CCAGTCAAACTACCCACCAAGCATT-3′；b.50μl?PCR反應體系中含有1.5mmol?MgCI₂，dNTP各200μmol，DNA模板5μl，1x緩沖液，1U?Taq酶，上下游引物濃度各0.1μmol；PCR擴增條件：94℃預變性5min，94℃變性30sec，53℃退火30sec，72℃延伸30sec共35個循環，72℃延伸10min；擴增DNA片段長度為286bp；3)、芯片雜交、顯色；取PCR擴增的地高辛標記的DNA樣品1μl和10μl雜交液混合，94℃變性5min后迅速冰上冷卻5min，取10μl混合液滴加于權利要求1所述的生物芯片的點樣區，蓋上蓋玻片，將芯片置于37℃預溫雜交盒內，烘箱孵浴30min后用60℃預熱的洗液I振蕩洗滌10min，洗液II漂洗1min吹干，在點樣區加2500倍稀釋的堿性磷酸酶標記的地高辛抗體20μl，37℃靜置30min，再用洗液II蕩洗30sec后加50μl平衡液靜置1min后，取適當大小的尼龍膜，浸泡顯色液10sec后小心覆蓋于芯片點樣區，迅速倒置在濕盒中，輕輕壓實，37℃避光靜置30min后，取下尼龍膜，去離子水漂洗，待干后用光學掃描儀或放大鏡觀察結果；?其中：雜交液組成為：750mmol/L?NaCl，75mmol/L乙酸鈉，0.1％SDS，1μg/ml鮭精DNA，25％甲酰胺；洗液I組成為：0.2％?SDS，150mmol/L?NaCl，150mmol/L乙酸鈉；洗液II組成為：150mmol/L順丁烯二酸，150mmol/L?NaCl，0.3％吐溫20，pH?7.5；平衡液組成為：0.1M?Tris-HCL，0.1M?NaCl；顯色液組成為：BCIP/NBT溶，Roche公司。?