本發(fā)明涉及產(chǎn)生胰島素類型的方法，所述方法通過遺傳改造胰島素類型的前體并且將所述前體在與賴氨酸酰胺或精氨酸酰胺的酶催化的連接反應(yīng)或者用經(jīng)保護(hù)基修飾的賴氨酸或精氨酸的酶催化的連接反應(yīng)中轉(zhuǎn)化為各自的胰島素，以及任選地隨后水解。

1.制備Gly(A21)，Arg(B31)，Arg(B32)人胰島素的方法，其中，
被酰胺化或用Boc保護(hù)基C-末端保護(hù)的精氨酸，在具有胰蛋白酶的生
物學(xué)活性的酶存在時被添加
到Gly(A21)，Arg(B31)人胰島素的B鏈的C-末端氨基酸上，
并且將得到的Gly(A21)，Arg(B31)，Arg(B32)人胰島素純化。
2.權(quán)利要求1的方法，還包括消除所添加的精氨酸的酰胺基團(tuán)或C-末
端Boc保護(hù)基。
3.權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中Gly(A21)，Arg(B31)，Arg(B32)
人胰島素的B鏈的C末端被酰胺化。
4.權(quán)利要求1所述的方法，其中Gly(A21)，Arg(B31)人胰島素通過重組
表達(dá)前體蛋白質(zhì)來制備，所述前體蛋白質(zhì)包含Gly(A21)，Arg(B31)人胰島素
的A鏈和B鏈。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其中作為復(fù)制子一部分的基因被表達(dá)。
6.權(quán)利要求4或5中任一項所述的方法，其中使用細(xì)菌或酵母作為宿主
細(xì)胞。
7.權(quán)利要求4所述的方法，其中前體蛋白質(zhì)在表達(dá)后被分泌。
8.權(quán)利要求7所述的方法，其中前體蛋白質(zhì)分離自細(xì)菌或酵母的細(xì)胞上
清液。
9.如權(quán)利要求6所述的方法，其中前體蛋白質(zhì)分離自細(xì)菌周質(zhì)。
10.權(quán)利要求4所述的方法，其中對獲得的前體蛋白質(zhì)實施折疊過程和
酶促切割。
11.權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中Gly(A21)，Arg(B31)人胰島素通
過重組定向表達(dá)制備。
12.權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中具有胰蛋白酶生物學(xué)活性的酶
選自人胰蛋白酶、豬胰蛋白酶、牛胰蛋白酶。
13.權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中酶具有賴氨酰內(nèi)肽酶活性。
14.權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中Gly(A21)，Arg(B31)，Arg(B32)
人胰島素的B鏈的C末端隨后在水解反應(yīng)中被脫保護(hù)。