本發(fā)明公開了一株高產(chǎn)L?亮氨酸工程菌及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了制備重組菌的方法，包括如下步驟：包括如下步驟：將α?異丙基蘋果酸合成酶突變體編碼基因?qū)肽康木校玫街亟M菌；所述α?異丙基蘋果酸合成酶突變體為將α?異丙基蘋果酸合成酶第494位精氨酸突變?yōu)榻M氨酸、第497位甘氨酸突變?yōu)樘於彼岷偷?99位亮氨酸突變?yōu)槔i氨酸得到的酶。本發(fā)明的高產(chǎn)L?亮氨酸的工程菌，特別是谷氨酸棒桿菌Corynebacterium glutamicum MD0032具有比目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)菌株更高的L?亮氨酸產(chǎn)酸率，具有獨(dú)特的鑒定標(biāo)簽，是一株極具生產(chǎn)應(yīng)用價(jià)值的L?亮氨酸的生產(chǎn)菌株。

1.一種制備重組菌的方法，包括如下步驟：將α-異丙基蘋果酸合成酶突變體編碼基因
導(dǎo)入目的菌中，得到重組菌；
所述α-異丙基蘋果酸合成酶突變體為僅將α-異丙基蘋果酸合成酶氨基酸序列第494位
精氨酸突變?yōu)榻M氨酸、第497位甘氨酸突變?yōu)樘於彼帷⒌?99位亮氨酸突變?yōu)槔i氨酸，且不
改變其他氨基酸殘基得到的蛋白質(zhì)；
所述α-異丙基蘋果酸合成酶的氨基酸序列為序列表中序列7；
所述目的菌為失活蘇氨酸脫水酶編碼基因、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶編碼基因、乳酸脫氫酶編碼
基因、D-泛酸合成酶編碼基因和亮氨酸合成調(diào)節(jié)子編碼基因活性的谷氨酸棒桿菌
(Corynebacterium glutamicum)突變菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述α-異丙基蘋果酸合成酶突變體的編碼
基因的核苷酸序列為序列表中序列1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述目的菌按照包括如下步驟的方法制備：將谷氨酸棒桿菌基因組中的蘇氨酸脫水酶
編碼基因替換為蘇氨酸脫水酶編碼基因突變基因ΔilvA、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶編碼基因替換為丙
氨酸轉(zhuǎn)氨酶編碼基因突變基因ΔalaT、乳酸脫氫酶編碼基因替換為乳酸脫氫酶編碼基因突
變基因Δldh、D-泛酸合成酶編碼基因替換為D-泛酸合成酶編碼基因突變基因ΔpanBC和亮
氨酸合成調(diào)節(jié)子編碼基因替換為亮氨酸合成調(diào)節(jié)子編碼基因突變基因ΔltbR，得到的谷氨
酸棒桿菌突變菌；
所述ΔilvA的核苷酸序列為序列表中序列2；
所述ΔalaT的核苷酸序列為序列表中序列3；
所述Δldh的核苷酸序列為序列表中序列4；
所述ΔpanBC的核苷酸序列為序列表中序列5；
所述ΔltbR的核苷酸序列為序列表中序列6。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述谷氨酸棒桿菌為谷氨酸棒桿菌ATCC13032。
5.由權(quán)利要求1-4中任一所述的方法制備的重組菌。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組菌，其特征在于：所述重組菌為谷氨酸棒桿菌
(Corynebacterium glutamicum)MD0032,其保藏號(hào)為CCTCC NO:M 2014620。
7.權(quán)利要求5或6所述重組菌在制備L-亮氨酸中的應(yīng)用。
8.一種制備L-亮氨酸的方法，包括如下步驟：發(fā)酵權(quán)利要求5或6所述重組菌，收集發(fā)酵
產(chǎn)物上清液，即得到L-亮氨酸。