本發明屬微生物領域，涉及一種用于革蘭氏陽性菌的高效轉座系統pBTn，采用溫度敏感性質粒pBT2作為載體，其成功轉入目的菌中后，通過升高培養溫度而被去除；溫度敏感性質粒中插入兩端帶有重復序列的紅霉素的耐藥基因，在紅霉素的耐藥基因和來源于mariner真核轉座子的轉座酶間插入來源于pTX15的啟動子，該啟動子在葡萄糖存在下被遏制表達，在無葡萄糖，木糖存在可活化，能有效地控制轉座酶表達的時間。本發明建立的轉座子突變文庫無明顯插入熱點，具有高度隨機性和單一性插入到革蘭氏陽性菌基因組的特點。實用性明顯高于目前被廣泛使用于原核生物的轉座系統Tn551或Tn917。

1.一種用于革蘭氏陽性菌的高效轉座系統，其特征是，該系統是以溫度敏
感性質粒作為唯一質粒載體的重組質粒，所述重組質粒上整合有藥物耐藥基因和
轉座酶，所述的耐藥基因和轉座酶之間插入特定的啟動子，使有效地控制轉座酶
表達的時間，無明顯基因的插入熱點，命名為pBTn；
所述的溫度敏感性質粒為pBT2，
所述的轉座酶來源于mariner真核轉座子；
所述的高效轉座系統通過下述方法制備，
1)用PCR方法從質粒pEC2擴增兩端帶有重復序列的紅霉素的耐藥基因并克
隆到溫度敏感性質粒pBT2上，重組質粒命名為pBT2IR；
2)將木糖誘導性啟動子基因從pTX15酶切下來連接入pBT2IR，重組質粒命
名為pBT2IRXY；
3)用PCR方法從質粒pBADA7擴增mariner?based的轉座酶基因并克隆到質
粒pBT2IRXY上，重組質粒命名為pBTn。
2.按權利要求1所述的用于革蘭氏陽性菌的高效轉座系統，其特征是所述
的溫度敏感性質粒pBT2，其轉入目的菌中后，通過升高培養溫度被去除。