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一種降低小麥花藥白苗率的培養基及其農桿菌轉化方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-11-27
  • 技術成熟度:正在研發
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201510304511.7 
  • 技術(專利)名稱 一種降低小麥花藥白苗率的培養基及其農桿菌轉化方法 
  • 項目單位 河北省農林科學院糧油作物研究所
  • 發明人 趙愛菊,彭慧茹,王江浩,倪中福,陳希勇,高增玉,趙亞靜,張麗,胡阿麗 
  • 行業類別 智慧健康-其他
  • 技術成熟度 正在研發
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 蔣一聞
  • 發布時間 2021-11-27  
  • 01

    項目簡介

    本發明“一種降低小麥花藥白苗率的培養基及其農桿菌轉化方法”,屬于遺傳轉化技術,所述MC17培養基是在C17基礎上添加了PAA和秋水仙堿,用麥芽糖代替了蔗糖。本發明請求還提供了基于該培養基的遺傳轉化方法,能夠顯著提高愈傷組織誘導率,抗性植株獲得率,降低白苗率,可積極推動小麥轉基因研究。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種小麥花藥愈傷組織誘導培養基,其特征在于配方如下:無水氯化鈣150mg/L、硝
    酸鉀1400mg/L、七水硫酸鎂150mg/L、硝酸銨300mg/L、磷酸二氫鉀400mg/L;硫酸錳8.5mg/L、
    硫酸鋅8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、碘化鉀0.83mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷
    0.025mg/L;硫酸亞鐵27.85mg/L、乙二胺四乙酸鈉37.25mg/L;甘氨酸1mg/L、VB1 0.5mg/L、
    VB6 0.25mg/L、煙酸0.25mg/L、生物素1mg/L、亮氨酸1mg/L、2,4-D 2mg/L、KT 0.5mg/L、水解
    乳蛋白500mg/L、PAA的濃度為1mg/L、秋水仙堿的濃度為0.01mg/L、麥芽糖的濃度為90g/L瓊
    脂3.7g/L。
    2.一種農桿菌介導的小麥花藥遺傳轉化方法,包括下述步驟:
    (1)誘導培養:獲得小麥花藥愈傷組織,
    (2)侵染:采用攜帶目標基因的農桿菌侵染步驟(1)獲得的小麥花藥愈傷組織,
    其特征在于:所述誘導培養采用的培養基為權利要求1所述的培養基。
    3.根據權利要求2所述的小麥花藥遺傳轉化方法,其特征在于,所述誘導培養的條件
    為:培養溫度為27~30℃,黑暗條件下培養40-60天。
    4.根據權利要求2所述的小麥花藥遺傳轉化方法,其特征在于,所述誘導培養采用的小
    麥花藥采自發育至單核中-晚期的小麥幼穗,用10%的次氯酸鈣消毒15min,然后用無菌蒸
    餾水沖洗。
    5.根據權利要求2所述的小麥花藥遺傳轉化方法,其特征在于,所述浸染采用的侵染培
    養液配方為:硝酸鉀190mg/L、硝酸銨165mg/L、磷酸二氫鉀17mg/L、無水氯化鈣44mg/L、七水
    硫酸鎂37mg/L;碘化鉀0.083mg/L、四水硫酸錳2.23mg/L、硼酸0.62mg/L、七水硫酸鋅
    0.86mg/L、六水氯化鈷0.0025mg/L、五水硫酸銅0.0025mg/L、二水鉬酸鈉0.025mg/L;硫酸亞
    鐵2.785mg/L、乙二胺四乙酸鈉3.725mg/L;甘氨酸2mg/L、VB1 0.4mg/L、VB6 0.5mg/L、煙酸
    0.5mg/L、肌醇100mg/L;麥芽糖40g/L、乙磺酸(MES)1.95g/L、谷氨酰胺0.1g/L、水解酪蛋白
    0.1g/L、葡萄糖10g/L、維生素C 100mg/L、4-氨基-3,5,6-三氯吡啶甲酸(Picloram)1mg/L、
    乙酰丁香酮(AS)39mg/L、pluronic F68 1ml/L。
    6.根據權利要求2~5任一所述的小麥花藥遺傳轉化方法,其特征在于,所述侵染之后,
    還包括共培養、誘導抗性愈傷組織、分化培養、生根培養,染色體加倍步驟;
    所述抗性愈傷組織恢復采用的培養基配方如下:硝酸鉀1900mg/L、硝酸銨1650mg/L、磷
    酸二氫鉀170mg/L、無水氯化鈣440mg/L、七水硫酸鎂370mg/L;碘化鉀0.83mg/L、四水硫酸錳
    22.3mg/L、硼酸6.2mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L、五水硫酸銅0.025mg/
    L、二水鉬酸鈉0.25mg/L;硫酸亞鐵27.85mg/L、乙二胺四乙酸鈉37.25mg/L;甘氨酸2mg/L、
    VB1 0.4mg/L、VB6 0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、肌醇100mg/L;蔗糖30g/L,Phytagel 2.7g/L,
    Dicamba 2mg/L、羧芐青霉素250mg/L、PPT 3mg/L;
    培養條件為:25℃黑暗條件下培養15-20天。
    7.根據權利要求6所述的小麥花藥遺傳轉化方法,其特征在于,所述分化培養采用的培
    養基配方為:硝酸鉀1900/L mg、硝酸銨1650mg/L、磷酸二氫鉀170mg/L、無水氯化鈣440mg/
    L、七水硫酸鎂370mg/L;碘化鉀0.83mg/L、四水硫酸錳22.3mg/L、硼酸6.2mg/L、七水硫酸鋅
    8.6mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、二水鉬酸鈉0.25mg/L;硫酸亞鐵
    27.85mg/L、乙二胺四乙酸鈉37.25mg/L;甘氨酸2mg/L、VB1 0.4mg/L、VB6 0.5mg/L、煙酸
    0.5mg/L、肌醇100mg/L;維生素C 100mg/L、2,4-D 0.5mg/L、蔗糖30g/L、Phytagel 2.7g/L、
    羧芐青霉素250mg/L、PPT 3mg/L;
    培養條件為:25℃條件下,每天光照12-14小時進行分化培養。
    8.根據權利要求6所述的小麥花藥遺傳轉化方法,其特征在于,所述生根培養采用的生
    根培養基配方為:硝酸鉀950/L mg、硝酸銨825mg/L、磷酸二氫鉀85mg/L、無水氯化鈣220mg/
    L、七水硫酸鎂185mg/L;碘化鉀0.83mg/L、四水硫酸錳22.3mg/L、硼酸6.2mg/L、七水硫酸鋅
    8.6mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、二水鉬酸鈉0.25mg/L;硫酸亞鐵
    27.85mg/L、乙二胺四乙酸鈉37.25mg/L;甘氨酸2mg/L、VB1 0.4mg/L、VB6 0.5mg/L、煙酸
    0.5mg/L、肌醇100mg/L;萘乙酸(NAA)1mg/L、多效唑3mg/L、蔗糖80g/L、Phytagel 2.7g/L、羧
    芐青霉素250mg/;
    培養條件為:愈傷組織分化出的抗性再生芽長至2-3cm左右時,將其轉入所述生根培養
    基上進行壯根培養,當不定根長到3-4cm時,將試管苗轉移至2-4℃冰箱中進行春化處理。
    9.根據權利要求2~5任一所述的小麥花藥遺傳轉化方法,其特征在于,將春化后的植
    株取出,徹底清除根部培養基,轉移至土壤中培養,成活生長到分孽盛期時,在顯微鏡下通
    過保衛細胞長度來鑒別小麥花粉植株倍性,保衛細胞65u以下的植株用0.75-1%的秋水仙
    堿與1.5%二甲基亞砜混合液在25℃條件下浸泡分蘗節4-5小時得到加倍純合個體。
    展開

專利技術附圖

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