1.一種小麥花藥愈傷組織誘導培養基,其特征在于配方如下:無水氯化鈣150mg/L、硝
酸鉀1400mg/L、七水硫酸鎂150mg/L、硝酸銨300mg/L、磷酸二氫鉀400mg/L;硫酸錳8.5mg/L、
硫酸鋅8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、碘化鉀0.83mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷
0.025mg/L;硫酸亞鐵27.85mg/L、乙二胺四乙酸鈉37.25mg/L;甘氨酸1mg/L、VB1 0.5mg/L、
VB6 0.25mg/L、煙酸0.25mg/L、生物素1mg/L、亮氨酸1mg/L、2,4-D 2mg/L、KT 0.5mg/L、水解
乳蛋白500mg/L、PAA的濃度為1mg/L、秋水仙堿的濃度為0.01mg/L、麥芽糖的濃度為90g/L瓊
脂3.7g/L。
2.一種農桿菌介導的小麥花藥遺傳轉化方法,包括下述步驟:
(1)誘導培養:獲得小麥花藥愈傷組織,
(2)侵染:采用攜帶目標基因的農桿菌侵染步驟(1)獲得的小麥花藥愈傷組織,
其特征在于:所述誘導培養采用的培養基為權利要求1所述的培養基。
3.根據權利要求2所述的小麥花藥遺傳轉化方法,其特征在于,所述誘導培養的條件
為:培養溫度為27~30℃,黑暗條件下培養40-60天。
4.根據權利要求2所述的小麥花藥遺傳轉化方法,其特征在于,所述誘導培養采用的小
麥花藥采自發育至單核中-晚期的小麥幼穗,用10%的次氯酸鈣消毒15min,然后用無菌蒸
餾水沖洗。
5.根據權利要求2所述的小麥花藥遺傳轉化方法,其特征在于,所述浸染采用的侵染培
養液配方為:硝酸鉀190mg/L、硝酸銨165mg/L、磷酸二氫鉀17mg/L、無水氯化鈣44mg/L、七水
硫酸鎂37mg/L;碘化鉀0.083mg/L、四水硫酸錳2.23mg/L、硼酸0.62mg/L、七水硫酸鋅
0.86mg/L、六水氯化鈷0.0025mg/L、五水硫酸銅0.0025mg/L、二水鉬酸鈉0.025mg/L;硫酸亞
鐵2.785mg/L、乙二胺四乙酸鈉3.725mg/L;甘氨酸2mg/L、VB1 0.4mg/L、VB6 0.5mg/L、煙酸
0.5mg/L、肌醇100mg/L;麥芽糖40g/L、乙磺酸(MES)1.95g/L、谷氨酰胺0.1g/L、水解酪蛋白
0.1g/L、葡萄糖10g/L、維生素C 100mg/L、4-氨基-3,5,6-三氯吡啶甲酸(Picloram)1mg/L、
乙酰丁香酮(AS)39mg/L、pluronic F68 1ml/L。
6.根據權利要求2~5任一所述的小麥花藥遺傳轉化方法,其特征在于,所述侵染之后,
還包括共培養、誘導抗性愈傷組織、分化培養、生根培養,染色體加倍步驟;
所述抗性愈傷組織恢復采用的培養基配方如下:硝酸鉀1900mg/L、硝酸銨1650mg/L、磷
酸二氫鉀170mg/L、無水氯化鈣440mg/L、七水硫酸鎂370mg/L;碘化鉀0.83mg/L、四水硫酸錳
22.3mg/L、硼酸6.2mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L、五水硫酸銅0.025mg/
L、二水鉬酸鈉0.25mg/L;硫酸亞鐵27.85mg/L、乙二胺四乙酸鈉37.25mg/L;甘氨酸2mg/L、
VB1 0.4mg/L、VB6 0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、肌醇100mg/L;蔗糖30g/L,Phytagel 2.7g/L,
Dicamba 2mg/L、羧芐青霉素250mg/L、PPT 3mg/L;
培養條件為:25℃黑暗條件下培養15-20天。
7.根據權利要求6所述的小麥花藥遺傳轉化方法,其特征在于,所述分化培養采用的培
養基配方為:硝酸鉀1900/L mg、硝酸銨1650mg/L、磷酸二氫鉀170mg/L、無水氯化鈣440mg/
L、七水硫酸鎂370mg/L;碘化鉀0.83mg/L、四水硫酸錳22.3mg/L、硼酸6.2mg/L、七水硫酸鋅
8.6mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、二水鉬酸鈉0.25mg/L;硫酸亞鐵
27.85mg/L、乙二胺四乙酸鈉37.25mg/L;甘氨酸2mg/L、VB1 0.4mg/L、VB6 0.5mg/L、煙酸
0.5mg/L、肌醇100mg/L;維生素C 100mg/L、2,4-D 0.5mg/L、蔗糖30g/L、Phytagel 2.7g/L、
羧芐青霉素250mg/L、PPT 3mg/L;
培養條件為:25℃條件下,每天光照12-14小時進行分化培養。
8.根據權利要求6所述的小麥花藥遺傳轉化方法,其特征在于,所述生根培養采用的生
根培養基配方為:硝酸鉀950/L mg、硝酸銨825mg/L、磷酸二氫鉀85mg/L、無水氯化鈣220mg/
L、七水硫酸鎂185mg/L;碘化鉀0.83mg/L、四水硫酸錳22.3mg/L、硼酸6.2mg/L、七水硫酸鋅
8.6mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、二水鉬酸鈉0.25mg/L;硫酸亞鐵
27.85mg/L、乙二胺四乙酸鈉37.25mg/L;甘氨酸2mg/L、VB1 0.4mg/L、VB6 0.5mg/L、煙酸
0.5mg/L、肌醇100mg/L;萘乙酸(NAA)1mg/L、多效唑3mg/L、蔗糖80g/L、Phytagel 2.7g/L、羧
芐青霉素250mg/;
培養條件為:愈傷組織分化出的抗性再生芽長至2-3cm左右時,將其轉入所述生根培養
基上進行壯根培養,當不定根長到3-4cm時,將試管苗轉移至2-4℃冰箱中進行春化處理。
9.根據權利要求2~5任一所述的小麥花藥遺傳轉化方法,其特征在于,將春化后的植
株取出,徹底清除根部培養基,轉移至土壤中培養,成活生長到分孽盛期時,在顯微鏡下通
過保衛細胞長度來鑒別小麥花粉植株倍性,保衛細胞65u以下的植株用0.75-1%的秋水仙
堿與1.5%二甲基亞砜混合液在25℃條件下浸泡分蘗節4-5小時得到加倍純合個體。
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