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對L-抗壞血酸進行微生物生產的方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-31
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200480023361.2 
  • 技術(專利)名稱 對L-抗壞血酸進行微生物生產的方法 
  • 項目單位 帝斯曼知識產權資產管理有限公司
  • 發明人 阿蘭·貝利,康妮·李,安妮·弗朗索瓦·邁耶,新城雅子 
  • 行業類別 醫藥制造-原料藥
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 周冰
  • 發布時間 2021-12-31  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種經過分離的多核苷酸分子,其是從編碼具有L-山梨糖酮脫氫酶活性的多肽的多核苷酸獲得的,所述多核苷酸分子包含SEQ ID NO:1的至少20個連續核苷酸的部分核苷酸序列。本發明還涉及以高產量生產L-抗壞血酸的方法,特別是,使用能將給定碳源轉化為維生素C的微生物的靜止細胞的方法??赏ㄟ^純化和/或分離步驟對由此得到的維生素C進行進一步的加工。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種經過分離的多核苷酸分子或其互補鏈,所述多核苷酸分子編碼
    具有L-山梨糖酮脫氫酶活性的多肽,所述多核苷酸分子選自:
    (a)編碼根據SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列的多核苷酸;
    (b)多核苷酸,其核苷酸序列如SEQ?NO:1或26的核苷酸序列所
    示;以及
    (c)多核苷酸,其互補鏈能在嚴謹條件下與(a)至(b)中任何一條
    所定義的多核苷酸雜交。
    2.一種多肽,所述多肽由權利要求1所述的多核苷酸編碼,并且具有
    L-山梨糖酮脫氫酶活性。
    3.一種表達載體,其中包含如權利要求1所述的多核苷酸。
    4.一種重組微生物,其已被如權利要求1所述的多核苷酸和/或權利要
    求3的表達載體所轉化,所述微生物選自由真菌和細菌細胞所構成的組。
    5.如權利要求4所述的重組微生物,其中所述生物是選自由葡萄糖桿
    菌(Gluconobacter)、醋酸桿菌(Acetobacter)、假單胞菌
    (Pseudomonas)和埃希氏菌(Escherichia)所構成的組的屬的細菌。
    6.一種用于從選自D-山梨糖醇、L-山梨糖和L-山梨糖酮的底物來生
    產L-抗壞血酸的方法,所述方法包括:
    (a)在合適的培養基中繁殖如權利要求4或5所述的重組微生物,以

    (b)從所述培養基中回收和分離L-抗壞血酸。
    7.一種用于從選自D-山梨糖醇、L-山梨糖和L-山梨糖酮的底物來生
    產L-抗壞血酸的方法,所述方法包括:
    (a)在合適的培養基中繁殖如權利要求4或5所述的重組微生物,
    (b)分離和純化L-山梨糖酮脫氫酶,
    (c)在存在(b)的L-山梨糖酮脫氫酶的情況下,對底物進行溫育;
    以及
    (d)從反應混合物中回收及分離L-抗壞血酸。
    8.一種用于生產L-山梨糖酮脫氫酶的方法,其中,在合適的培養基中
    繁殖包含如權利要求1所述的多核苷酸的重組微生物,對細胞進行破碎,
    以及對L-山梨糖酮脫氫酶進行分離。
    9.一種用于生產維生素C的方法,所述方法包括:在包含根據權利要
    求4或5的微生物的靜止細胞的培養基中,將底物轉化為維生素C,其
    中,產生的維生素C的產量為至少1.8g/l。
    10.如權利要求9所述的方法,包括如下步驟:
    (a)在能進行生長的條件下培養所述微生物,
    (b)改變所述條件,使得所述微生物的生長速率降低,導致靜止細
    胞產生;以及
    (c)用(b)的靜止細胞從底物生產維生素C其中步驟(a)和(c)
    不被任何洗滌和/或分離步驟分開。
    11.如權利要求9所述的方法,其中,作為600nm處的OD來測量的
    培養基中靜止細胞的密度為至少10。
    12.如權利要求9所述的方法,其中,所述微生物選自由酵母、藻類
    和細菌所構成的組。
    13.如權利要求9所述的方法,其中,所述微生物選自由假絲酵母屬
    (Candida)、酵母屬(Saccharomyces)、接合酵母屬
    (Zygosaccharomyces)、Scyzosaccharomyces、克魯維酵母屬
    (Kluyveromyces)、小球藻屬(Chlorella)、葡萄糖桿菌屬
    (Gluconobacter)、醋酸桿菌(Acetobacter?aceti)、Pantoea、隱球菌屬
    (Cryptococcus)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、和埃希氏菌屬
    (Escherichia)所構成的組。
    14.如權利要9所述的方法,其中,所述底物選自由D-葡萄糖、D-山
    梨糖醇、L-山梨糖、L-山梨糖酮、2-酮-L-古洛糖酸鹽/酯、D-葡萄糖酸鹽/
    酯、2-酮-D-葡萄糖酸鹽/酯和2,5-二酮-葡萄糖酸鹽/酯所構成的組。
    15.如權利要求9所述的方法,其中,使用能從底物生產維生素C和
    2-酮-L-古洛酸的微生物,并且其中,維生素C和2-KGA濃度之間的比例
    大于0.1。
    16.如權利要求9所述的方法,進一步包括:從所述培養基中分離出
    維生素C。
    17.如權利要求6所述的方法,進一步包括:利用電滲析從所述培養
    基組分中分離出維生素C。
    18.如權利要求7所述的方法,進一步包括:利用電滲析從所述培養
    基組分中分離出維生素C。
    19.如權利要求9所述的方法,進一步包括:利用電滲析從所述培養
    基組分中分離出維生素C。
    20.如權利要求10所述的方法,進一步包括:利用電滲析從所述培養
    基組分中分離出維生素C。
    展開

專利技術附圖

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