1.一種經過分離的多核苷酸分子或其互補鏈,所述多核苷酸分子編碼
具有L-山梨糖酮脫氫酶活性的多肽,所述多核苷酸分子選自:
(a)編碼根據SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列的多核苷酸;
(b)多核苷酸,其核苷酸序列如SEQ?NO:1或26的核苷酸序列所
示;以及
(c)多核苷酸,其互補鏈能在嚴謹條件下與(a)至(b)中任何一條
所定義的多核苷酸雜交。
2.一種多肽,所述多肽由權利要求1所述的多核苷酸編碼,并且具有
L-山梨糖酮脫氫酶活性。
3.一種表達載體,其中包含如權利要求1所述的多核苷酸。
4.一種重組微生物,其已被如權利要求1所述的多核苷酸和/或權利要
求3的表達載體所轉化,所述微生物選自由真菌和細菌細胞所構成的組。
5.如權利要求4所述的重組微生物,其中所述生物是選自由葡萄糖桿
菌(Gluconobacter)、醋酸桿菌(Acetobacter)、假單胞菌
(Pseudomonas)和埃希氏菌(Escherichia)所構成的組的屬的細菌。
6.一種用于從選自D-山梨糖醇、L-山梨糖和L-山梨糖酮的底物來生
產L-抗壞血酸的方法,所述方法包括:
(a)在合適的培養基中繁殖如權利要求4或5所述的重組微生物,以
及
(b)從所述培養基中回收和分離L-抗壞血酸。
7.一種用于從選自D-山梨糖醇、L-山梨糖和L-山梨糖酮的底物來生
產L-抗壞血酸的方法,所述方法包括:
(a)在合適的培養基中繁殖如權利要求4或5所述的重組微生物,
(b)分離和純化L-山梨糖酮脫氫酶,
(c)在存在(b)的L-山梨糖酮脫氫酶的情況下,對底物進行溫育;
以及
(d)從反應混合物中回收及分離L-抗壞血酸。
8.一種用于生產L-山梨糖酮脫氫酶的方法,其中,在合適的培養基中
繁殖包含如權利要求1所述的多核苷酸的重組微生物,對細胞進行破碎,
以及對L-山梨糖酮脫氫酶進行分離。
9.一種用于生產維生素C的方法,所述方法包括:在包含根據權利要
求4或5的微生物的靜止細胞的培養基中,將底物轉化為維生素C,其
中,產生的維生素C的產量為至少1.8g/l。
10.如權利要求9所述的方法,包括如下步驟:
(a)在能進行生長的條件下培養所述微生物,
(b)改變所述條件,使得所述微生物的生長速率降低,導致靜止細
胞產生;以及
(c)用(b)的靜止細胞從底物生產維生素C其中步驟(a)和(c)
不被任何洗滌和/或分離步驟分開。
11.如權利要求9所述的方法,其中,作為600nm處的OD來測量的
培養基中靜止細胞的密度為至少10。
12.如權利要求9所述的方法,其中,所述微生物選自由酵母、藻類
和細菌所構成的組。
13.如權利要求9所述的方法,其中,所述微生物選自由假絲酵母屬
(Candida)、酵母屬(Saccharomyces)、接合酵母屬
(Zygosaccharomyces)、Scyzosaccharomyces、克魯維酵母屬
(Kluyveromyces)、小球藻屬(Chlorella)、葡萄糖桿菌屬
(Gluconobacter)、醋酸桿菌(Acetobacter?aceti)、Pantoea、隱球菌屬
(Cryptococcus)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、和埃希氏菌屬
(Escherichia)所構成的組。
14.如權利要9所述的方法,其中,所述底物選自由D-葡萄糖、D-山
梨糖醇、L-山梨糖、L-山梨糖酮、2-酮-L-古洛糖酸鹽/酯、D-葡萄糖酸鹽/
酯、2-酮-D-葡萄糖酸鹽/酯和2,5-二酮-葡萄糖酸鹽/酯所構成的組。
15.如權利要求9所述的方法,其中,使用能從底物生產維生素C和
2-酮-L-古洛酸的微生物,并且其中,維生素C和2-KGA濃度之間的比例
大于0.1。
16.如權利要求9所述的方法,進一步包括:從所述培養基中分離出
維生素C。
17.如權利要求6所述的方法,進一步包括:利用電滲析從所述培養
基組分中分離出維生素C。
18.如權利要求7所述的方法,進一步包括:利用電滲析從所述培養
基組分中分離出維生素C。
19.如權利要求9所述的方法,進一步包括:利用電滲析從所述培養
基組分中分離出維生素C。
20.如權利要求10所述的方法,進一步包括:利用電滲析從所述培養
基組分中分離出維生素C。
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