本發明公開了一種非巰基核酸?納米金偶聯物的制備方法及其應用。該方法包括：（1）將末端含有多聚腺嘌呤PolyAx的寡核苷酸加入金納米粒子的分散液，并加入檸檬酸鈉緩沖液混合均勻、孵育，而后離心去除游離的所述寡核苷酸，而保留所述寡核苷酸與金納米粒子的復合物；（2）將步驟（1）最終所獲復合物以中性磷酸鹽緩沖液重懸，再次加入所述寡核苷酸、封閉試劑以及氯化鈉溶液，再次孵育，并離心除去游離的所述寡核苷酸及封閉試劑，獲得所述非巰基核酸?納米金偶聯物。該方法可應用于DNA的可視化檢測及制備DNA檢測試劑盒。本發明制備的核酸?納米金穩定性高，應用于核酸檢測時具有快速、靈敏、動態范圍寬、低成本、操作簡便等優點，適于推廣應用。

1.一種非巰基核酸-納米金偶聯物的制備方法，其特征在于包括：
(1)將末端含有多聚腺嘌呤PolyAx的寡核苷酸加入粒徑為15-50nm的金納米粒子的分
散液，并加入檸檬酸鈉緩沖液混合均勻、孵育，而后離心去除游離的所述寡核苷酸，而保留
所述寡核苷酸與金納米粒子的復合物，x≥10；
(2)將步驟(1)最終所獲寡核苷酸與金納米粒子的復合物以中性磷酸鹽緩沖液重懸，再
次加入所述寡核苷酸、封閉試劑以及氯化鈉溶液，再次孵育，并離心除去游離的所述寡核苷
酸及封閉試劑，獲得所述非巰基核酸-納米金偶聯物；
其中，所述封閉試劑選自dATP或巰基十一烷酸。
2.權利要求1所述方法在制備DNA檢測試劑盒中的應用。
3.一種DNA檢測試劑盒，其特征在于包括：
第一探針，主要由5’端含有多聚腺嘌呤PolyAx的第一寡核苷酸與金納米粒子經權利要
求1所述方法所制成的非巰基核酸-納米金偶聯物組成；
第二探針，主要由3’端含有多聚腺嘌呤PolyAx的第二寡核苷酸與金納米粒子經權利要
求1所述方法所制成的非巰基核酸-納米金偶聯物組成；
以及，用以構成適于進行核酸雜交反應的液相環境的輔助試劑，所述輔助試劑pH值＝
7.4，且含有150-300mM NaCl的、濃度為0.01M的磷酸鹽緩沖液；
其中，所述第一寡核苷酸和第二寡核苷酸分別能夠與目標DNA中的不同核酸序列互補
雜交，x≥10，所述金納米粒子的粒徑為15-50nm；
所述試劑盒的使用方法包括：將所述第一探針和第二探針混合，并加入可能含有能夠
與所述第一寡核苷酸和第二寡核苷酸互補雜交的核酸序列的目標DNA的樣品，在適于進行
核酸雜交反應的液相環境中進行互補雜交反應，通過測定雜交反應體系的可見光吸收強度
變化，實現對樣品的檢測，所述可見光的波長為520nm、650nm。
4.根據權利要求3所述的DNA檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒的使用方法具體包
括：
取所述第一探針和第二探針按照1：1的摩爾比均勻混合，并加入雜交緩沖液和一系列
具有不同濃度的目標DNA標準樣品，形成一系列不同混合體系進行核酸雜交反應，反應結束
后，檢測一系列不同混合體系可見光光吸收值，由此確定光吸收強度隨目標DNA濃度變化的
標準曲線；
以及，取所述第一探針和第二探針按照1：1的摩爾比均勻混合，并加入雜交緩沖液和待
檢測樣品進行核酸雜交反應，反應結束后檢測所獲混合反應物的可見光光吸收值，并依據
所述標準曲線而計算出待檢測樣品所含目標DNA的濃度。