本發(fā)明公開(kāi)了一種稀磷酸結(jié)合汽爆預(yù)處理改進(jìn)木質(zhì)纖維酶解糖化的方法，利用黑曲霉C112進(jìn)行液體發(fā)酵生產(chǎn)β?葡萄糖苷酶，在一定培養(yǎng)條件下，所得β?葡萄糖苷酶酶活力可達(dá)15.496IU/ml。將黑曲霉C112生產(chǎn)的β?葡萄糖苷酶與里氏木霉RUT C30生產(chǎn)的纖維素酶進(jìn)行酶系復(fù)合，制備出高活性復(fù)合纖維素酶，用于處理經(jīng)稀磷酸浸漬蒸汽爆破處理后的木質(zhì)纖維酶解糖化率可達(dá)到80％以上，同步糖化共發(fā)酵乙醇得率達(dá)到83.191％。

1.一種稀磷酸結(jié)合汽爆預(yù)處理改進(jìn)木質(zhì)纖維酶解糖化的方法，其特征在于，風(fēng)干楊木
屑，木屑直徑為1-2mm,長(zhǎng)度為2-15mm，1％磷酸按固液比1:2.5預(yù)浸漬1h，在蒸汽爆破壓強(qiáng)為
2MPa，保壓時(shí)間180s，爆發(fā)速度：0.00875S條件下進(jìn)行爆破；測(cè)得含水率為80％，按絕干重的
爆破物占發(fā)酵罐裝載量體積的10％裝入2.5L發(fā)酵罐中，裝量為1.5L，除開(kāi)加入的爆破物，檸
檬酸緩沖液和氨水，KH₂PO₄，CaCl₂·H₂O，MgSO₄·7H₂O，酶外，余量為水，加入發(fā)酵罐裝載量體
積30％的0.05mol/L的檸檬酸緩沖液，再用1mol/L氨水中和脫毒調(diào)節(jié)pH值至5.5±0.5，加入
KH₂PO₄ 0.5g/L，CaCl₂·H₂O 0.4g/L，MgSO₄·7H₂O 0.4g/L，以濾紙酶活FPU為20IU/g加入制
備的混合酶液，50℃下酶解12h后，降溫至37℃，加入發(fā)酵菌種釀酒酵母和大腸桿菌KO11混
合酶解發(fā)酵96h，細(xì)胞干重初始濃度分別為1g/L和0.33g/L；采用氣相色譜法測(cè)得乙醇濃度
為30.585mg/ml，乙醇得率達(dá)到83.191％；
所述的混合酶液的制備方法如下：分別將保藏編號(hào)為CCTCC NO：M2012129的黑曲霉
C112生產(chǎn)的β-葡萄糖苷酶與保藏編號(hào)為ATCC 56765的里氏木霉RUT C30生產(chǎn)的纖維素酶濃
縮提純，濃縮后的酶液混合使得β-葡萄糖苷酶活/濾紙酶活比值為1.536；黑曲霉C112通過(guò)
產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的培養(yǎng)基得到高活力的β-葡萄糖苷酶，培養(yǎng)基配方為：玉米芯25g/L，稻草
粉30g/L，蛋白胨5g/L，(NH₄)₂SO₄ 10g/L，KH₂PO₄ 6g/L，CaCl₂·2H₂O 0.9g/L，MgSO₄·7H₂O
0.9g/L，吐溫-80 1ml/L，Mandels微量元素濃縮液1ml/L，1mol/L檸檬酸緩沖液100ml/L，加
水配制成1L；
黑曲霉C112的產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的培養(yǎng)過(guò)程如下：將黑曲霉菌C112的種子培養(yǎng)液，以體
積百分比5-8％的接種量接種于裝有40-60ml產(chǎn)酶培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，26-28℃，180-
220r/min條件下培養(yǎng)4-6天，離心，取上清液得到粗酶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的稀磷酸結(jié)合汽爆預(yù)處理改進(jìn)木質(zhì)纖維酶解糖化的方法，其特
征在于，
黑曲霉C112的種子培養(yǎng)：從保存的黑曲霉C112土豆固體平板培養(yǎng)基中挑取孢子，接種
于裝有40-60ml種子培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，26-28℃，180-220r/min條件下培養(yǎng)2～3天作為
接種物；黑曲霉C112種子培養(yǎng)基：馬鈴薯250～300g/L，葡萄糖15～25g/L，pH值6.5～7.0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的稀磷酸結(jié)合汽爆預(yù)處理改進(jìn)木質(zhì)纖維酶解糖化的方法，其特
征在于，
黑曲霉C112生產(chǎn)的纖維素酶β-葡萄糖苷酶活為13.368～15.496U/mL，濾紙酶活為
0.183～0.215IU/mL，經(jīng)超濾濃縮儀濃縮后，β-葡萄糖苷酶活為18.793～24.741U/mL，濾紙
酶活為0.785～0.932IU/mL；里氏木霉RUT C30生產(chǎn)的纖維素酶β-葡萄糖苷酶活為1.205～
1.652U/mL，濾紙酶活為5.931～6.212IU/mL；經(jīng)超濾濃縮儀濃縮后，β-葡萄糖苷酶活為
9.379～12.662U/mL，濾紙酶活為43.335～48.912IU/mL。