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一種杯珊瑚菌菌絲多糖的提取方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-07-10
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201310480672.2 
  • 技術(專利)名稱 一種杯珊瑚菌菌絲多糖的提取方法 
  • 項目單位 甘肅省商業科技研究所
  • 發明人 陳朋,嚴曉娟,梁寧,胡先望 
  • 行業類別 智慧健康-其他
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 鄭俞涵
  • 發布時間 2021-07-10  
  • 01

    項目簡介

    本發明涉及一種杯珊瑚菌菌絲多糖的提取方法,該方法包括以下步驟:⑴制備馬鈴薯葡萄糖斜面培養基;⑵制備種子培養基;⑶制備發酵培養基;⑷杯珊瑚菌菌絲接種至馬鈴薯葡萄糖斜面培養基,經恒溫培養得菌絲體;⑸菌絲體接種至種子培養基,經振蕩培養得菌種種子液;⑹菌種種子液接種至發酵培養基,經振蕩培養得發酵液;發酵液離心、洗滌、烘干、磨粉后,得到菌絲體干粉末;⑺菌絲體干粉末先超聲提取再浸提得到多糖浸提液;⑻多糖浸提液離心、過濾、濃縮后得到多糖濃縮液;⑼多糖濃縮液加Sevag試劑離心后得多糖提取液;⑽多糖提取液脫色后得多糖流出液;⑾多糖流出液加乙醇靜置,得沉淀物;⑿離心干燥即得多糖干品。本發明操作簡單,成本低,多糖得率高。
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  • 02

    說明書

    1.一種杯珊瑚菌菌絲多糖的提取方法,包括以下步驟:⑴制備馬鈴薯葡萄糖斜面培養基:將馬鈴薯洗凈去皮切碎,按其質量的4~6倍加水煮沸25~35min后用紗布過濾,得到濾液A,該濾液A補足至1.0L依次加入5~10g葡萄糖和5~10g瓊脂,使其pH值為6.0~8.0,在90~100℃溫度下充分加熱溶解后分裝,在壓強為1.05Kg/cm2、溫度為121℃的條件下滅菌20min即得;⑵制備種子培養基:將馬鈴薯洗凈去皮切碎,按其質量的4~6倍加水煮沸25~35min后用紗布過濾,得到濾液B,該濾液B補足至1.0L加入5~10g葡萄糖,使其pH值為6.0~8.0,在90~100℃溫度下充分加熱溶解后分裝,在壓強為1.05Kg/cm2、溫度為121℃的條件下滅菌20min即得;⑶制備發酵培養基:將馬鈴薯洗凈去皮切碎,按其質量的4~6倍加水煮沸25~35min后用紗布過濾,得到濾液C,該濾液C補足至1.0L加入5~10g葡萄糖,使其pH值為6.0~8.0,在90~100℃溫度下充分加熱溶解后分裝,在壓強為1.05Kg/cm2、溫度為121℃的條件下滅菌20min即得;⑷真菌的發酵培養:接一環杯珊瑚菌菌絲至所述馬鈴薯葡萄糖斜面培養基上,于28℃恒溫培養4~10天后,置于4℃冰箱中,得到活化培養后的菌絲體;所述杯珊瑚菌菌絲是指采集于隴南康縣的杯珊瑚菌ArtomycespyxidatusKX320SH按常規方法經組織分離獲得的杯珊瑚菌菌絲;所述杯珊瑚菌ArtomycespyxidatusKX320SH在中國典型培養物保藏中心的保藏編號為CCTCCNO:M2012112,其分子生物學鑒定后的核酸序列提交至GenBank的登錄號為JQ086388;⑸接一環所述活化培養后的菌絲體至裝有10mL所述種子培養基的試管中,并置于恒溫振蕩器上,在28℃條件下以100~200r/min的速率進行振蕩培養4~10天,制得pH值為5.0~7.0的菌種種子液;⑹將所述菌種種子液按5~20%的接種量接種至含有所述發酵培養基的搖瓶中,并置于恒溫振蕩器上,在28℃條件下以100~200r/min的速率進行振蕩培養4~10天,即得發酵液;所述發酵液在高速冷凍離心機中于5000r/min離心20min,得到菌絲體;所述菌絲體用蒸餾水洗滌后在真空干燥箱于60℃下烘干至恒重后磨成粉,得到菌絲體干粉末;所述發酵培養基在所述搖瓶中的裝瓶量為10~30%;⑺在所述菌絲體干粉末中按1g:10mL~30mL的料液比加入去離子水,在功率為100~300W的條件下超聲提取10~30min后,在溫度為80~95℃的條件下浸提次數1~3次,每次1~3h,合并提取液,得到多糖浸提液;⑻將所述多糖浸提液在高速冷凍離心機中于4000r/min離心10~20min過濾后,得到上清液A,該上清液A在溫度為60℃、真空度為0.06~0.08MPa的條件下濃縮至原上清液A體積的1/5~1/3,得到多糖濃縮液;⑼在所述多糖濃縮液中按其體積的1/4加入Sevag試劑,充分混合攪拌20min,再用高速冷凍離心機以5000r/min離心20min除掉變性蛋白質,棄去水與有機相間的蛋白變性層,收集上清液B,反復多次直到所述上清液B與有機相中間有清晰的分界面為止,視為蛋白質除盡,即得多糖提取液;所述Sevag試劑是指氯仿與正丁醇按4mL:1mL混合而成的混合液;⑽將50~100mL所述多糖提取液以2~5mL/min的流速通過苯乙烯系大孔弱堿性陰樹脂離子交換樹脂床進行脫色,得到多糖流出液;⑾在所述多糖流出液中按其體積的2~4倍加入質量濃度為95%的乙醇,在4℃下靜置24h,得到沉淀物A;⑿將所述沉淀物A經高速冷凍離心機以4000r/min離心20min后,得到沉淀物B,該沉淀物B置于真空干燥箱內,經50℃真空干燥至恒重,即得多糖干品。
    展開

專利技術附圖

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