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一種產谷氨酸的溫敏型重組谷氨酸棒狀桿菌及其應用

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-19
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201610139302.6 
  • 技術(專利)名稱 一種產谷氨酸的溫敏型重組谷氨酸棒狀桿菌及其應用 
  • 項目單位 天津科技大學
  • 發明人 謝希賢,陳寧,石拓,馬躍超,徐慶陽,張成林,李燕軍 
  • 行業類別 智慧健康-其他
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 衛可頤
  • 發布時間 2021-12-19  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供一種產谷氨酸的溫敏型重組谷氨酸棒狀桿菌,是通過改造野生型谷氨酸棒桿菌(C.glutamicum ATCC 13032),敲除其基因組中肽聚糖合成途徑中的兩個關鍵基因UDP?N?烯醇式乙酰葡萄糖胺轉移酶基因(murA)和UDP?N?乙酰胞壁酸脫氫酶基因(murB),獲得溫敏型重組菌,重組菌的谷氨酸產量得到明顯提升,在發酵溫度提高至38.5℃情況下谷氨酸產量為4?7g/L。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種產谷氨酸的溫敏型重組谷氨酸棒狀桿菌,其特征在于敲除野生型谷氨酸棒桿菌
    C.glutamicum ATCC 13032的UDP-N-烯醇式乙酰葡萄糖胺轉移酶基因和UDP-N-乙酰胞壁酸
    脫氫酶基因,獲得溫敏型重組菌。
    2.如權利要求1所述的一種產谷氨酸的溫敏型重組谷氨酸棒狀桿菌,其特征在于,以
    C.glutamicum ATCC 13032為出發菌株,通過PCR方法擴增得到murA基因上游同源臂和murB
    基因下游同源臂,并通過重疊PCR將上下游同源臂重疊,得到重疊片段;將重疊片段用EcoR
    I和Hind III雙酶切,與同樣雙酶切的表達載體pK18mobsacB連接,構建重組質粒;將重組質
    粒電轉化至菌株C.glutamicum ATCC 13032中;篩選出完成了兩次同源重組的重組子,實現
    murA、murB基因的敲除,獲得溫敏型重組菌。
    3.權利要求1或2所述溫敏型重組谷氨酸棒狀桿菌的用途,其特征在于,用于發酵生產
    谷氨酸。
    4.一種利用權利要求1或2所述重組谷氨酸棒狀桿菌發酵生產谷氨酸的方法,其特征在
    于,包括如下步驟:
    (1)將菌體接種到斜面培養基中活化,32℃培養24-36h;
    (2)將活化好的菌種接入種子培養基中,32℃,200rpm,培養6-8h;
    (3)將培養好的種子按10%接種量接入發酵培養基中,32℃,200rpm發酵培養;
    (4)待發酵培養至菌體OD600=12-16時,將發酵溫度提高至38.5℃,200rpm培養至總發
    酵28-32h;
    所述斜面培養基的組成為:蛋白胨1%,酵母粉0.5%,牛肉膏1%,NaCl 0.25%,MgSO4
    0.05%,KH2PO4 0.1%,玉米漿2%,瓊脂2%;
    所述種子培養基的組成為:葡萄糖30g/L,K2HPO4·3H2O 0.2g/L,MgSO4·7H2O 0.8g/L,
    MnSO4 2mg/L,FeSO4 2mg/L,VB1 0.3mg/L,VH 0.2mg/L,酵母粉10g/L,蛋白胨5g/L,尿素0.5g/
    L,Met1g/L;
    所述發酵培養基的組成為:葡萄糖8g/L,K2HPO4·3H2O 0.4g/L,VH 0.35mg/L,VB10.5mg/
    L,甜菜堿5g/L,MnSO4 30mg/L,FeSO4 30mg/L,MgSO4·7H2O 2g/L,酵母粉15g/L,蛋白胨5g/
    L。
    展開

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