1.一種產谷氨酸的溫敏型重組谷氨酸棒狀桿菌,其特征在于敲除野生型谷氨酸棒桿菌
C.glutamicum ATCC 13032的UDP-N-烯醇式乙酰葡萄糖胺轉移酶基因和UDP-N-乙酰胞壁酸
脫氫酶基因,獲得溫敏型重組菌。
2.如權利要求1所述的一種產谷氨酸的溫敏型重組谷氨酸棒狀桿菌,其特征在于,以
C.glutamicum ATCC 13032為出發菌株,通過PCR方法擴增得到murA基因上游同源臂和murB
基因下游同源臂,并通過重疊PCR將上下游同源臂重疊,得到重疊片段;將重疊片段用EcoR
I和Hind III雙酶切,與同樣雙酶切的表達載體pK18mobsacB連接,構建重組質粒;將重組質
粒電轉化至菌株C.glutamicum ATCC 13032中;篩選出完成了兩次同源重組的重組子,實現
murA、murB基因的敲除,獲得溫敏型重組菌。
3.權利要求1或2所述溫敏型重組谷氨酸棒狀桿菌的用途,其特征在于,用于發酵生產
谷氨酸。
4.一種利用權利要求1或2所述重組谷氨酸棒狀桿菌發酵生產谷氨酸的方法,其特征在
于,包括如下步驟:
(1)將菌體接種到斜面培養基中活化,32℃培養24-36h;
(2)將活化好的菌種接入種子培養基中,32℃,200rpm,培養6-8h;
(3)將培養好的種子按10%接種量接入發酵培養基中,32℃,200rpm發酵培養;
(4)待發酵培養至菌體OD600=12-16時,將發酵溫度提高至38.5℃,200rpm培養至總發
酵28-32h;
所述斜面培養基的組成為:蛋白胨1%,酵母粉0.5%,牛肉膏1%,NaCl 0.25%,MgSO4
0.05%,KH2PO4 0.1%,玉米漿2%,瓊脂2%;
所述種子培養基的組成為:葡萄糖30g/L,K2HPO4·3H2O 0.2g/L,MgSO4·7H2O 0.8g/L,
MnSO4 2mg/L,FeSO4 2mg/L,VB1 0.3mg/L,VH 0.2mg/L,酵母粉10g/L,蛋白胨5g/L,尿素0.5g/
L,Met1g/L;
所述發酵培養基的組成為:葡萄糖8g/L,K2HPO4·3H2O 0.4g/L,VH 0.35mg/L,VB10.5mg/
L,甜菜堿5g/L,MnSO4 30mg/L,FeSO4 30mg/L,MgSO4·7H2O 2g/L,酵母粉15g/L,蛋白胨5g/
L。
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