本發明公開了一種異枝江蘺原生質體的制備方法，具體步驟為：(1)材料的預處理；(2)配制消化用酶液；(3)將步驟(1)中得到的材料加入步驟(2)配制好的消化用酶液中，放入25?30℃的恒溫搖床上進行黑暗酶解，反應2?3h后，得到酶解液；(4)將步驟(3)中得到的酶解液用含有1mol/L的葡萄糖的消毒海水進行沖洗離心，制得異枝江蘺原生質體。本發明提供的異枝江蘺原生質體的制備方法簡單，原生質體生產效率高，用本發明自制的消化用酶液酶解異枝江蘺可獲得較高密度的原生質體，每克材料可獲得7.7×10個原生質體，為市售酶酶解效率的7?8倍。

1.一種異枝江蘺原生質體的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：（1）首先，挑選幼嫩且活力旺盛的藻體，清洗干凈后用0.5g/L I₂-KI溶液浸泡10s，后用大量的消毒海水進行沖洗，并放入消毒海水中暫養后，取出藻體，吸水紙將藻體上水分吸干后用解剖刀將藻體切碎，得到材料；（2）配制消化用酶液；（3）將步驟（1）中得到的材料加入步驟（2）配制好的消化用酶液中，所述材料與消化用酶液的質量體積比為1g/10mL，放入25-30℃的恒溫搖床上進行黑暗酶解，每30 min鏡檢一次，觀察并拍照，反應2-3h后，得到酶解液；（4）用篩絹對步驟（3）中得到的酶解液進行過濾，去除未消化的細胞、細胞團和碎片，取上清液進行離心處理，使單細胞原生質體下沉，細胞碎片留在上清液中，棄去上清液，用含有1mol/L的葡萄糖的消毒海水進行沖洗離心2-3次，收集沉淀后用含有1mol/L的葡萄糖的消毒海水懸浮至1 mL，制得異枝江蘺原生質體；步驟（2）中所述的消化用酶液為：自制纖維素酶與消毒海水的混合液，每10 mL消化用酶液由1.5 mL的自制纖維素酶和8.5 mL的消毒海水組成；所述的自制纖維素酶的制備方法為：配制50mmol/L醋酸緩沖液并調整pH為4.8-5.0，分別按1g/10mL的量加入纖維素酶，充分溶解，并調整自制纖維素酶的最終濃度為2%，即得自制纖維素酶；步驟（3）中所述的材料與消化用酶液的質量體積比為1g/10mL，表示每 10 mL制備好的消化用酶液加入1.0 g材料；步驟（1）中所述的暫養溫度為24℃，光照強度為3000lx，暫養時間為1-2天；步驟（4）中所使用的篩絹目數為200目，所述的離心的速度為800rpm，離心的時間為10min。