本發(fā)明公開了一種用于聚乙二醇干擾素的偶聯(lián)方法，其包括以下步驟：將重組人干擾素濃縮液與活化聚乙二醇溶液混合充分進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)后，再以pH值為4.5的10mM醋酸鈉緩沖液終止上述反應(yīng)，得到偶聯(lián)反應(yīng)液；將所述偶聯(lián)反應(yīng)液通過離子交換層析分離得到純度≥95%之單修飾的聚乙二醇干擾素，將所述單修飾的聚乙二醇干擾素通過切向流超濾系統(tǒng)進(jìn)行置換緩沖系統(tǒng)的處理，將其置于磷酸鈉緩沖液中，最終得到聚乙二醇干擾素蛋白。大幅度增加了修飾效率，實現(xiàn)了蛋白質(zhì)藥物性能的改善，本發(fā)明通過特定的偶聯(lián)反應(yīng)工藝，有利于偶聯(lián)產(chǎn)物的后續(xù)提純，提高了目標(biāo)產(chǎn)品回收率，降低了聚乙二醇干擾素的制造成本。

1.一種用于聚乙二醇干擾素的偶聯(lián)方法，其包括以下步驟：A、將重組人干擾素濃縮液與活化聚乙二醇溶液混合充分進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)后，再以pH4.5的10?mM醋酸鈉緩沖液終止上述反應(yīng)，得到偶聯(lián)反應(yīng)液；B、將所述偶聯(lián)反應(yīng)液通過EMD?COO^-?-650離子交換層析分離得到純度≥95%之單修飾的聚乙二醇干擾素，將所述單修飾的聚乙二醇干擾素通過切向流超濾進(jìn)行置換緩沖系統(tǒng)的處理，將其置換于磷酸鈉緩沖液中，最終得到聚乙二醇干擾素蛋白；在所述步驟A之前還包括：將重組干擾素原液通過切向流超濾系統(tǒng)濃縮至蛋白濃度為2.0?-10.0?mg/ml，再用50mM的硼酸鹽緩沖液滲濾，得到所述重組人干擾素濃縮液；所述步驟A具體的包括：將所述活化聚乙二醇溶解于冷卻至2℃-8℃的乙腈溶液中，使其終濃度為40-80?mg/ml，使所述活化聚乙二醇的量為所述重組人干擾素濃縮液蛋白總量的2-8倍；所述偶聯(lián)反應(yīng)在堿性條件下反應(yīng)2-6小時；所述步驟B具體的包括：以2-6倍的醋酸鈉緩沖液平衡上樣后的離子交換層析柱，再以含20?mM?-80mM氯化鈉的醋酸鈉緩沖液洗脫，根據(jù)紫外檢測儀分段收集洗脫峰，以SDS-PAGE電泳法檢測純度，得到純度≥95%之單修飾的聚乙二醇干擾素；所述聚乙二醇干擾素電泳純度明顯提高，偶聯(lián)后的電泳偶聯(lián)率及蛋白收獲率顯著提高。