本文公開了用于鑒定生物樣品、特別是獸醫來源的樣品中病毒特有的多核苷酸序列的方法和組合物。還公開了可用于檢測一種或多種病毒來源的哺乳動物病原體的一種或多種特定的種、毒株、類型或亞型的存在情況的寡核苷酸引物對和標記的寡核苷酸檢測探針，以及包含病毒特異性引物和標記的檢測探針的系統、診斷試劑盒和制造品，包括可用于鑒定多價疫苗的病毒成分和定量測定包括家畜疫苗的特定減毒活病毒的效價的系統、診斷試劑盒和制造品。在某些實施方案中，實時定量PCR方法已被用來鑒定和區分多價牛科動物船運熱疫苗中牛病毒性腹瀉病毒的3種已知遺傳亞型(BVDV-1a、BVDV-1b和BVDV-2)。

1.一種適用于檢測多個減毒活病毒顆粒內如若存在的BVDV-1b病毒特異性核酸的組合
物，所述組合物包含：
(a)第一病毒特異性寡核苷酸擴增引物，其由SEQIDNO:1的核苷酸序列組成；
(b)第二病毒特異性寡核苷酸擴增引物，其由SEQIDNO:2組成的核苷酸序列組成；和
(c)至少第一標記的病毒特異性檢測探針，其由標記的核苷酸序列組成，所述核苷酸
序列由SEQIDNO:3組成；其中所述組合物適用于使用定量實時聚合酶鏈式反應(qPCR)檢
測病毒特異性核酸。
2.一種用于檢測樣品中多核苷酸群中BVDV-1b病毒特異性多核苷酸的存在情況的方
法，所述方法包括：
在(i)含有其中多個減毒活病毒顆粒能夠復制的培養的牛細胞的測定板和(ii)相應的
沒有細胞的參比板中稀釋疑似含有所述減毒活病毒顆粒的樣品；
使來自樣品的核酸與權利要求1的組合物接觸；并且
如果BVDV-1b-特異性核酸分子存在于樣品中則進行定量實時聚合酶鏈式反應(qPCR)
以產生病毒特異性擴增產物；
其中所述多個減毒活病毒顆粒包含在哺乳動物疫苗中。
3.權利要求2的方法，其中所述哺乳動物疫苗是牛BRDC或船運熱疫苗。
4.權利要求2的方法，其中所述多個減毒活病毒顆粒包含選自牛皰疹病毒1(BHV-1)、
牛副流感3型病毒(PI₃)、牛呼吸道合胞病毒(BRSV)和牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)的一種或多
種病毒。
5.權利要求2-4中任一項的方法，其中所述多個減毒活病毒顆粒包含牛病毒性腹瀉病
毒1a型(BVDV-1a)、牛病毒性腹瀉病毒1b型(BVDV-1b)和牛病毒性腹瀉病毒2型(BVDV-2)中
的一種或多種。
6.權利要求2-4中任一項的方法，其中標記的檢測探針還包含非熒光猝滅劑或小溝結
合劑。
7.權利要求2-4中任一項的方法，其中檢測探針用6-羧基-熒光素進行熒光標記。
8.權利要求1的組合物在檢測獲自哺乳動物疫苗的多核苷酸群中減毒的BVDV-1b-特異
性多核苷酸中的用途。
9.權利要求8的用途，其中所述用途用于自包含在多價牛船運熱疫苗內的多個減毒活
病毒顆粒中檢測BVDV-1b特異性多核苷酸。
10.權利要求1的組合物在制備試劑盒中的用途，所述試劑盒用于檢測多個減毒活病毒
顆粒內如若存在的BVDV-1b病毒特異性核酸。