本發明公開了一種3F3Rmg重組融合蛋白及其制備方法，該重組融合蛋白由3F3ScFv和Rmg基因拼接而成的3F3Rmg融合基因所編碼，具有序列表SEQ.ID.No.1的堿基序列。它的雙功能特性使得其既能與人紅細胞結合但不會發生凝集，又能與狂犬病G抗體反應，在抗體橋聯作用下發生肉眼可觀察到的凝集現象。應用該重組融合蛋白制備的檢測犬狂犬病抗體紅細胞凝集試驗診斷試劑盒，其操作簡單、靈敏度高且特異性強，特別適合犬狂犬病抗體的檢測，滿足了基層現場使用快速、簡便的要求。

1.一種3F3Rmg重組融合蛋白，其特征在于該蛋白的氨基酸序列為序列表SEQ.ID.No.2。
2.根據權利要求1所述3F3Rmg重組融合蛋白的制備方法，其特征在于該制備方法包括以
下步驟：
<1>利用特異性引物分別從pMD-3F3ScFv和pMD-RV-G重組基因中分別擴增出3F3ScFv和Rmg
基因，采用SOE-PCR方法拼接成3F3Rmg融合基因；所述3F3ScFv和Rmg基因的堿基序列
分別為序列表SEQ.ID.No.7和SEQ.ID.No.8；
<2>將3F3Rmg融合基因插入到原核表達載體pET-Trx中，構建重組質粒pET-Trx-3F3RmG，
轉化表達菌株BL21(DE3)PlysS中，在IPTG的誘導下表達出3F3RmG融合蛋白。
3.根據權利要求2所述的3F3Rmg重組融合蛋白的制備方法，其特征在于：所述特異性引
物為
3F3ScFv-U：cgc?gga?tcc?cag?gtg?cag?ttg?gga?gtg?tca，
3F3ScFv-D：ggt?gca?tcc?ttc?atc?tat?ttc?caa?ctt?tgt?ccc?cga；
Rmg-U：aca?aag?ttg?gaa?ata?gat?gaa?gga?tgc?acc?aat?ctg，
Rmg-D：ccg?gaa?ttc?tat?aat?gcc?gtt?gaa?aat?cac。
4.根據權利要求3所述的3F3Rmg重組融合蛋白的制備方法，其特征在于該制備方法還包
括以下步驟：
<3>通過Ni⁺親和層析純化、谷胱甘肽法復性、透析和濃縮后獲得了具有生物學活性的
3F3Rmg融合蛋白，經紅細胞凝集試驗證實該融合蛋白既能夠與人紅細胞結合但不會發生凝
集，又能夠與Rmg抗體反應，具有雙功能特性。
5.根據權利要求4所述的3F3Rmg重組融合蛋白的制備方法，其特征在于：所述人紅細胞
為人A型、B型、AB型、O型紅細胞。
6.權利要求1所述3F3Rmg重組融合蛋白在制備檢測犬狂犬病抗體紅細胞凝集試驗診斷試
劑盒中的應用。
7.一種檢測犬狂犬病抗體紅細胞凝集試驗診斷試劑盒，其特征在于該診斷試劑盒包括0.2
μg/μL的權利要求1所述的3F3Rmg重組融合蛋白的診斷液和2%的人紅細胞溶液。
8.根據權利要求7所述的檢測犬狂犬病抗體紅細胞凝集試驗診斷試劑盒，其特征在于該
診斷試劑盒每劑包括所述診斷液50μL和所述人紅細胞溶液20μL。