本發明公開了一種用于多重連接擴增技術的長探針的制備方法，包括以下步驟：1)與待檢測靶片段無關的模板核苷酸序列選擇，并根據UT和目標核苷酸序列設計引物；2)人工合成引物；3)PCR擴增；4)PCR產物與親和素磁珠混合；5)PCR產物變性解鏈；6)分離非生物素標記的單鏈核苷酸序列，即得到可用于多重連接擴增技術的長探針。本發明所述MLPA長探針的制備方法利用簡單的PCR擴增和親和素磁珠結合過程即可獲得MLPA長探針，操作步驟簡單容易，避免了進行噬菌體感染等獲取長探針的耗時長且復雜的操作過程，大大降低了進行MLPA技術應用的門檻，使得普通的實驗室也能順利地進行該項實驗。

1.用于多重連接擴增技術的長探針的制備方法，包括以下步驟：
1)針對目標核苷酸序列和用于制備長探針的與待檢測靶片段無關
的模板核苷酸序列設計一對PCR擴增引物，分別為通用引物和檢測引物；
所述檢測引物由兩段核苷酸序列組成，一段根據目標核苷酸序列設計，
另一段根據與待檢測靶片段無關的模板核苷酸序列設計；
2)在通用引物的5’端標記生物素；
3)以所述與待檢測靶片段無關的模板核苷酸序列為模板進行PCR
擴增，獲得生物素標記的雙鏈核苷酸序列；
4)將所述生物素標記的雙鏈核苷酸序列與親和素磁珠混合；
5)使生物素標記的雙鏈核苷酸序列變性，解鏈形成單鏈；
6)離心，取上清，獲得非生物素標記的單鏈核苷酸序列。
2.根據權利要求1所述的可用于多重連接擴增技術的長探針的制
備方法，其特征在于：步驟4)所述PCR擴增得到的生物素標記的雙鏈
核苷酸序列經過純化后再與親和素磁珠混合。
3.根據權利要求1所述的可用于多重連接擴增技術的長探針的制
備方法，其特征在于：所述每1份重量份生物素標記的雙鏈核苷酸序列
與10份重量份的親和素磁珠混合。
4.根據權利要求1所述的可用于多重連接擴增技術的長探針的制
備方法，其特征在于：步驟5)所述生物素標記的雙鏈核苷酸序列加熱
變性或者在堿性條件下變性。
5.根據權利要求1所述的可用于多重連接擴增技術的長探針的制
備方法，其特征在于：所述步驟6)的離心條件為4℃，轉速10,000rpm，
離心30sec。