本發明公開了一種細菌鑒定試劑盒，包括指示劑、培養基和測試碳源，選用噻唑蘭作為細菌能否利用測試碳源的指示劑，是一種利用96孔酶標板，預裝95種不同碳源的培養基，1孔不加碳源作對照，用于快速鑒定細菌碳源利用譜的試劑盒。本發明試劑盒包含一些檢測特定的生理特性的碳源和常見碳源，選用噻唑蘭作為指示劑，方便肉眼觀察細菌是否生長利用該碳源，更可用酶標儀在600nm波長處，快速直接測定細菌生長狀況。本發明試劑盒生產成本低，鑒定時間短，20～24小時出結果，可鑒定革蘭氏陰性細菌和陽性細菌，具有指示劑靈敏度高、操作簡便、準確等優點。

1.一種用于鑒定陰溝腸桿菌或百脈根根瘤菌碳源利用的試劑盒，包括96孔酶標板、培養基、測試碳源和指示劑，其特征在于所述指示劑為0.5％噻唑蘭；所述培養基成分為：A組分：900mLNaNO₃10g，K₂HPO₄2.0g，KH₂PO₄1.0g，NaCl?0.1g，CaCl₂0.1g，FeCl₃0.01g，MgSO₄.7H₂O?0.3g，MnSO₄.4H₂O?58μM，H₃BO₃82μM，ZnSO₄.7H₂O?3.5μM，KI?6.0μM，CuSO₄.5H₂O?0.8μM，Na₂MoO₄.2H₂O?0.4μM，CoCl₂.6H₂O?0.4μM，FeSO₄.7H₂O?54μM，Na₂-EDTA54μM；B組分：下列a，b，c各2.5mLa.生物素20μg，VB1240μg，蒸餾水100mLb.鹽酸硫胺素10mg，煙酸10mg，泛酸鈣10mg，對氨基苯甲酸10mg，蒸餾水100mLc.葉酸2mg，0.001N?NaOH?100mL；所述測試碳源包括糊精、淀粉、吐溫40、吐溫80、L-阿拉伯糖、D-阿拉伯糖、蔗糖、D-葡萄糖、麥芽糖、D-甘露糖、D-乳糖、D-半乳糖、山梨糖、L-果糖、D-果糖、D-蜜二糖、龍膽二糖、D-纖維二糖、D-棉子糖、L-棉子糖、D-木糖、木糖、菊糖、D-松三糖、松二糖、D-核糖、塔格糖、D-海藻糖、D-甘露醇、L-阿糖醇、D-阿糖醇、D-山梨醇、木糖醇、己六醇(山梨糖醇)、m-肌醇、氨基乙醇、赤藻糖醇、半乳糖醇、側金盞花醇、甲酸鈉、乙酸鈉、丙酸鈣、丙二酸鈣、α-酮戊二酸、丙酮酸鈉、草酸鈉、香草酸、葵二酸、羥基苯乙酸、苯甲酸鈉、葡萄糖酸鈉、檸檬酸鈉、馬尿酸鈉、琥珀酸鈉、脫氧膽酸鈉、水楊酸鈉、乳酸鈉、酒石酸鉀鈉、衣康酸、烏頭酸、L-蘋果酸、γ-氨基丁酸、苦杏仁苷、肌苷、尿苷、水楊苷、甘油、尿素、羥甲基纖維素、D-葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸鹽、丁二胺、N-乙酰基-D-葡萄糖胺、L-谷胺酰氨、L-谷氨酸、L-丙氨酸、D-丙氨酸、L-甘氨酸、鳥氨酸鹽酸鹽、L-蘇氨酸、L-賴氨酸、L-脯氨酸、L-組氨酸、L-色氨酸、L-纈氨酸、L-亮氨酸、L-絲氨酸、L-精氨酸、L-胱氨酸、L-羥脯氨酸、L-天冬氨酸、L-酪氨酸、L-甲硫氨酸和苯丙氨酸。2.權利要求1所述試劑盒的制備方法，其特征在于在96孔酶標板的每孔中各加入含指示劑的基礎培養基135μL；第一孔中加入15μL無菌水，其余的95孔中對應加入15μL?0.1％的測試碳源，使其總體積為150μL；用冷凍干燥儀將培養基干燥；用真空無菌袋將其封裝保存。3.權利要求1所述試劑盒的使用方法，其特征在于包括以下步驟：(1)、將待測菌株用相應的培養基平板活化1-2次；(2)、收集新生長的待測菌株，用0.9％的生理鹽水離心洗滌菌體2次，無菌水稀釋菌體，制成OD₆₀₀值為1.5的菌懸液；(3)、取步驟(2)OD₆₀₀為1.5的菌懸液0.5ml加入無菌的15ml含半固體態的0.2％瓊脂-去離子水中，搖勻混合完全；(4)、用八通道移液器取步驟(3)菌懸液150μL加入試劑盒的各孔中；(5)、將加好菌懸液的試劑盒放入28-37℃恒溫細菌培養箱中培養，根據通常細菌的最佳生長溫度確定培養溫度；(6)、培養18至24小時后對試劑盒進行觀察，以A1為對照孔確定細菌碳源利用情況。