本發明公開了一種人C肽(C-P)的定量測定試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含C-P磁分離試劑，酶反應物，反應增強劑，稀釋液，C-P校準品、C-P質控品，清洗液濃縮液以及底物溶液。本發明還公開了該試劑盒的制備方法。本發明試劑盒將化學發光技術與免疫磁微粒相結合，提供了一種接近均相的反應體系，與現有技術相比，本發明試劑盒具有更高的檢測靈敏度和特異性，同時在出結果時間上相對現有技術縮短了至少10分鐘，并達到了較佳的性能參數，并且大大降低了產品成本。

1.一種人C肽C-P的定量測定試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含C-P磁分離試劑，酶反應物，反應增強劑，稀釋液，C-P校準品、C-P質控品，清洗液濃縮液以及底物溶液；所述的C-P磁分離試劑含有標記有抗C-P單克隆抗體的磁性微球；所述的酶反應物是含有堿性磷酸酶標記的抗C-P單克隆抗體；所述的反應增強劑是含有Tris的緩沖液；所述稀釋液是含有BSA的溶液；所述的校準品及質控品是含有一定量的C-P抗原的BSA溶液；所述清洗液濃縮液是含有Tween-20和Proclin-300的緩沖液；所述的底物溶液為酶促化學發光底物溶液；所述試劑盒中各組分按照如下制備方法制得：一、磁分離試劑的制備過程一)、磁珠緩沖液配制操作步驟，配制1L：1、稱取Tris?4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，稱取0.96g?Tween-20于20mL容器中加適量水使其完全溶解后，倒入上述1L容器中；2、用移液器將Proclin-300量取0.2mL于10mL純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中，然后在上述1L容器中加入800mL純化水，充分攪拌；3、調節pH，控制pH在7.95-8.05之間；4、稱取BSA?3g倒入上述1L容器中；5、最后定容至1000mL，用0.2μm濾器過濾即得；二)、磁分離試劑的制備過程1、將1.0mg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50μl?DMSO中，取2mg抗C-P單克隆抗體溶于pH?9.5的0.1mol/L?PB緩沖液中至總體積為1mL；2、用移液槍吸取上述辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中，置室溫90min；3、將步驟2的溶液加入到濃縮管中，然后放入到高速冷凍離心機中在3000g下離心30min濃縮至0.5mL；4、取0.5mL磁珠，加入5mL反應杯中，經磁鐵吸附2分鐘后吸取上清，然后加入1.5mL?pH9.50.1mol/L?PB，混勻30秒，然后加入步驟3獲得的抗體溶液，混勻后室溫反應4小時；5、加入0.3mL?1mol/L的Tris溶液37℃15分鐘，然后加入1.5mL?pH?7.2?0.1mol/L?PB清洗已經標記的磁珠，混勻30秒；?6、用100mL磁珠保存液將磁珠轉入玻璃瓶；7、將步驟6獲得的溶液與上述磁珠緩沖液按照1∶1的體積比例混勻，即得磁分離試劑；二、酶反應物的制備過程一)、酶反應物稀釋液配制操作步驟，配制1L：1、取Tris?6.06g、NaCl?13.0g、Zncl₂?0.05g、Proclin-300?0.2mL和MgCl₂?0.05g于燒瓶中，然后在燒瓶中加入800mL純化水，充分攪拌，使試劑完全溶解；2、調pH，控制pH在7.35-7.45范圍內；3、稱取BSA?3g倒入上述燒杯中；4、最后定容至1000mL，用0.2μm濾器過濾即得；二)、堿性磷酸酶ALP與抗C-P單克隆抗體的偶聯1、取10mgALP加入5mL生理鹽水中，加入到濃縮管中，3000rpm離心20分鐘，濃縮至1毫升；2、向步驟1獲得濃縮液中加入0.2mL的0.1M?NaIO₄溶液，室溫下避光攪拌20分鐘，然后裝入透析袋中，用1mM?pH4.4的醋酸鈉緩沖液透析，4℃過夜，收集保留液；3、向步驟2獲得保留液中加入0.2M?pH9.5碳酸鹽緩沖液，使pH升高到9.0，然后立即加入2.5mg抗C-P單克隆抗體，攪拌2小時，再加入0.1mL的4mg/mL?NaBH₄溶液，混勻，置4℃下2小時；4、將上述溶液裝入透析袋中，用0.15M?pH7.4?PBS透析，4℃過夜，收集保留液；5、向步驟4獲得保留液中逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4℃1小時，然后3000rpm離心半小時，棄上清，沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次，最后沉淀物溶于20mL的0.15M?pH7.4的PBS中；6、將步驟5獲得的溶液裝入透析袋中，用0.15M?pH7.4的PB緩沖液透析5個小時去除銨離子，收集保留液后10,000rpm離心30分鐘去除沉淀，收集上清液，按照體積比為1∶100的比例添加1M?MgCl₂溶液，即得堿性磷酸酶ALP與抗C-P單克隆抗體的偶聯物；將收集到的堿性磷酸酶ALP與抗C-P單克隆抗體的偶聯物用上述步驟一)獲得的酶反應物稀釋液以1∶1000的體積比混合均勻，即得酶反應物；三、反應增強劑的制備過程，配制1L：1、取Tris1.56g和NaCl?4.23g于1L容器中，取0.2mL?Proclin-300于10mL純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；2、取800mL純化水于上述1L容器中，充分攪拌直至完全溶解，調pH在7.35-7.45之間；?3、稱取Mak33?0.9g于上述1L容器中；最后定容1000mL，完全溶解后，用0.2μm濾器過濾即得；四、稀釋液的制備過程，配制1L：1、稱取NaCl9.0g和BSA?60g于1L的容器中；2、取0.5mL?Proclin-300加10mL純化水溶解，倒入上述1L的容器中；3、最后定容1000mL，完全溶解后，用0.2μm濾器過濾即得；五、C-P校準品和C-P質控品的配制：C-P校準品中C-P抗原的濃度分別為0.3，0.75，2.5，7.5，20ng/mL；C-P質控品中C-P抗原的濃度分別為0.75、7.5ng/mL；六、清洗液濃縮液的制備過程，配制1L：1、取Tris?12.54g和NaCl?325.6g于1L容器中；2、取5g?Tween-20于100mL容器中加20mL水使其完全溶解后，倒入上述1L容器中；3、取0.2mL?Proclin-300于盛有10mL純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中；4、取800mL純化水于上述1L容器中，充分攪拌，直至完全溶解；5、調pH，控制其范圍在7.35-7.45之間；6、最后定容1000mL，完全溶解后用0.2μm濾器過濾即得；七、底物溶液的制備過程，配制1L：1、取Tris?2.35g、NaCl?6.41g、Na₂SO₃?0.002g和Proclin-300?0.2mL于1L燒杯中；2、取600mL純化水于1L燒杯中，充分攪拌直至完全溶解，調pH在7.95-8.05之間；3、加入250mL?Lumi-Phos?480，用0.2μm濾器過濾收集濾液，用純化水定容至1000mL，混勻后即得。