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C肽(C-P)定量測定試劑盒

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-09-27
  • 技術成熟度:通過小試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201110257437.X 
  • 技術(專利)名稱 C肽(C-P)定量測定試劑盒 
  • 項目單位 李貞陽
  • 發明人 李貞陽 
  • 行業類別 醫療器械-治療設備
  • 技術成熟度 通過小試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 趙湛博
  • 發布時間 2021-09-27  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種人C肽(C-P)的定量測定試劑盒,其特征在于,該試劑盒包含C-P磁分離試劑,酶反應物,反應增強劑,稀釋液,C-P校準品、C-P質控品,清洗液濃縮液以及底物溶液。本發明還公開了該試劑盒的制備方法。本發明試劑盒將化學發光技術與免疫磁微粒相結合,提供了一種接近均相的反應體系,與現有技術相比,本發明試劑盒具有更高的檢測靈敏度和特異性,同時在出結果時間上相對現有技術縮短了至少10分鐘,并達到了較佳的性能參數,并且大大降低了產品成本。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種人C肽C-P的定量測定試劑盒,其特征在于,該試劑盒包含C-P磁分離試劑,酶反應物,反應增強劑,稀釋液,C-P校準品、C-P質控品,清洗液濃縮液以及底物溶液;所述的C-P磁分離試劑含有標記有抗C-P單克隆抗體的磁性微球;所述的酶反應物是含有堿性磷酸酶標記的抗C-P單克隆抗體;所述的反應增強劑是含有Tris的緩沖液;所述稀釋液是含有BSA的溶液;所述的校準品及質控品是含有一定量的C-P抗原的BSA溶液;所述清洗液濃縮液是含有Tween-20和Proclin-300的緩沖液;所述的底物溶液為酶促化學發光底物溶液;所述試劑盒中各組分按照如下制備方法制得:一、磁分離試劑的制備過程一)、磁珠緩沖液配制操作步驟,配制1L:1、稱取Tris?4.58g和NaCl6.81g于1L容器中,稱取0.96g?Tween-20于20mL容器中加適量水使其完全溶解后,倒入上述1L容器中;2、用移液器將Proclin-300量取0.2mL于10mL純化水的燒杯中完全溶解后,倒入上述1L容器中,然后在上述1L容器中加入800mL純化水,充分攪拌;3、調節pH,控制pH在7.95-8.05之間;4、稱取BSA?3g倒入上述1L容器中;5、最后定容至1000mL,用0.2μm濾器過濾即得;二)、磁分離試劑的制備過程1、將1.0mg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50μl?DMSO中,取2mg抗C-P單克隆抗體溶于pH?9.5的0.1mol/L?PB緩沖液中至總體積為1mL;2、用移液槍吸取上述辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中,置室溫90min;3、將步驟2的溶液加入到濃縮管中,然后放入到高速冷凍離心機中在3000g下離心30min濃縮至0.5mL;4、取0.5mL磁珠,加入5mL反應杯中,經磁鐵吸附2分鐘后吸取上清,然后加入1.5mL?pH9.50.1mol/L?PB,混勻30秒,然后加入步驟3獲得的抗體溶液,混勻后室溫反應4小時;5、加入0.3mL?1mol/L的Tris溶液37℃15分鐘,然后加入1.5mL?pH?7.2?0.1mol/L?PB清洗已經標記的磁珠,混勻30秒;?6、用100mL磁珠保存液將磁珠轉入玻璃瓶;7、將步驟6獲得的溶液與上述磁珠緩沖液按照1∶1的體積比例混勻,即得磁分離試劑;二、酶反應物的制備過程一)、酶反應物稀釋液配制操作步驟,配制1L:1、取Tris?6.06g、NaCl?13.0g、Zncl2?0.05g、Proclin-300?0.2mL和MgCl2?0.05g于燒瓶中,然后在燒瓶中加入800mL純化水,充分攪拌,使試劑完全溶解;2、調pH,控制pH在7.35-7.45范圍內;3、稱取BSA?3g倒入上述燒杯中;4、最后定容至1000mL,用0.2μm濾器過濾即得;二)、堿性磷酸酶ALP與抗C-P單克隆抗體的偶聯1、取10mgALP加入5mL生理鹽水中,加入到濃縮管中,3000rpm離心20分鐘,濃縮至1毫升;2、向步驟1獲得濃縮液中加入0.2mL的0.1M?NaIO4溶液,室溫下避光攪拌20分鐘,然后裝入透析袋中,用1mM?pH4.4的醋酸鈉緩沖液透析,4℃過夜,收集保留液;3、向步驟2獲得保留液中加入0.2M?pH9.5碳酸鹽緩沖液,使pH升高到9.0,然后立即加入2.5mg抗C-P單克隆抗體,攪拌2小時,再加入0.1mL的4mg/mL?NaBH4溶液,混勻,置4℃下2小時;4、將上述溶液裝入透析袋中,用0.15M?pH7.4?PBS透析,4℃過夜,收集保留液;5、向步驟4獲得保留液中逐滴加入等體積飽和硫酸銨,置4℃1小時,然后3000rpm離心半小時,棄上清,沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次,最后沉淀物溶于20mL的0.15M?pH7.4的PBS中;6、將步驟5獲得的溶液裝入透析袋中,用0.15M?pH7.4的PB緩沖液透析5個小時去除銨離子,收集保留液后10,000rpm離心30分鐘去除沉淀,收集上清液,按照體積比為1∶100的比例添加1M?MgCl2溶液,即得堿性磷酸酶ALP與抗C-P單克隆抗體的偶聯物;將收集到的堿性磷酸酶ALP與抗C-P單克隆抗體的偶聯物用上述步驟一)獲得的酶反應物稀釋液以1∶1000的體積比混合均勻,即得酶反應物;三、反應增強劑的制備過程,配制1L:1、取Tris1.56g和NaCl?4.23g于1L容器中,取0.2mL?Proclin-300于10mL純化水的燒杯中完全溶解后,倒入上述1L容器中;2、取800mL純化水于上述1L容器中,充分攪拌直至完全溶解,調pH在7.35-7.45之間;?3、稱取Mak33?0.9g于上述1L容器中;最后定容1000mL,完全溶解后,用0.2μm濾器過濾即得;四、稀釋液的制備過程,配制1L:1、稱取NaCl9.0g和BSA?60g于1L的容器中;2、取0.5mL?Proclin-300加10mL純化水溶解,倒入上述1L的容器中;3、最后定容1000mL,完全溶解后,用0.2μm濾器過濾即得;五、C-P校準品和C-P質控品的配制:C-P校準品中C-P抗原的濃度分別為0.3,0.75,2.5,7.5,20ng/mL;C-P質控品中C-P抗原的濃度分別為0.75、7.5ng/mL;六、清洗液濃縮液的制備過程,配制1L:1、取Tris?12.54g和NaCl?325.6g于1L容器中;2、取5g?Tween-20于100mL容器中加20mL水使其完全溶解后,倒入上述1L容器中;3、取0.2mL?Proclin-300于盛有10mL純化水的燒杯中完全溶解后,倒入上述1L容器中;4、取800mL純化水于上述1L容器中,充分攪拌,直至完全溶解;5、調pH,控制其范圍在7.35-7.45之間;6、最后定容1000mL,完全溶解后用0.2μm濾器過濾即得;七、底物溶液的制備過程,配制1L:1、取Tris?2.35g、NaCl?6.41g、Na2SO3?0.002g和Proclin-300?0.2mL于1L燒杯中;2、取600mL純化水于1L燒杯中,充分攪拌直至完全溶解,調pH在7.95-8.05之間;3、加入250mL?Lumi-Phos?480,用0.2μm濾器過濾收集濾液,用純化水定容至1000mL,混勻后即得。
    展開

專利技術附圖

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