本發(fā)明公開了一種腰椎間盤退變相關SNP的檢測試劑盒。該試劑盒包括以下成分：特異性引物、特異性探針、標準DNA模板、熒光定量PCR反應液。本發(fā)明還公開了一種檢測腰椎間盤退變相關SNP熒光定量PCR試劑盒的使用方法。利用該試劑盒可以快速定量檢測SNP位點的突變情況，從而預測腰椎間盤退變發(fā)生情況。本發(fā)明操作簡便、快速、結果穩(wěn)定、靈敏度高且特異性強。

1.一種針對SNP位點檢測的試劑在制備檢測腰椎間盤退變試劑盒中的應用，其特征在于，所述SNP位點為以下位點的一個或多個，其在GeneBank中的編號分別為：rs151058、rs229052、rs162502；所述試劑為檢測SNP位點突變的特異性引物及特異性探針；所述特異性引物包括上游引物和下游引物，所述特異性探針包括陽性探針和陰性探針；對于rs151058來說，所述特異性引物及特異性探針分別為上游引物1其序列如序列表SEQ?ID?NO.1所示，下游引物2其序列如序列表SEQ?ID?NO.2所示，陽性特異性熒光探針3，其序列如序列表SEQ?ID?NO.3所示，陰性特異性熒光探針4，其序列如序列表SEQ?IDNO.4所示；對于rs229052來說，所述特異性引物及特異性探針分別為上游引物5其序列如序列表SEQ?ID?NO.5所示，下游引物6其序列如序列表SEQ?ID?NO.6所示，陽性特異性熒光探針7，其序列如序列表SEQ?ID?NO.7所示，陰性特異性熒光探針8，其序列如序列表SEQ?ID?NO.8所示；對于rs162502來說，所述特異性引物及特異性探針分別為上游引物9其序列如序列表SEQ?ID?NO.9所示，下游引物10其序列如序列表SEQ?ID?NO.10所示，陽性特異性熒光探針11，其序列如序列表SEQ?ID?NO.11所示，陰性特異性熒光探針12，其序列如序列表SEQ?ID?NO.12所示。2.一種檢測ADAMTS-5基因SNP位點突變的特異性引物及特異性探針，其特征在于，所述的特異性引物及特異性探針為3組，其中每組特異性引物包括上游引物和下游引物，特異性探針包括陽性探針和陰性探針；其中第一組特異性引物及特異性探針分別為上游引物1其序列如序列表SEQ?ID?NO.1所示，下游引物2其序列如序列表SEQ?ID?NO.2所示，陽性特異性熒光探針3，其序列如序列表SEQ?ID?NO.3所示，陰性特異性熒光探針4，其序列如序列表SEQ?ID?NO.4所示；其中第二組特異性引物及特異性探針分別為上游引物5其序列如序列表SEQ?ID?NO.5所示，下游引物6其序列如序列表SEQ?ID?NO.6所示，陽性特異性熒光探針7，其序列如序列表SEQ?ID?NO.7所示，陰性特異性熒光探針8，其?序列如序列表SEQ?IDNO.8所示；其中第三組特異性引物及特異性探針分別為上游引物9其序列如序列表SEQ?ID?NO.9所示，下游引物10其序列如序列表SEQ?ID?NO.10所示，陽性特異性熒光探針11，其序列如序列表SEQ?ID?NO.11所示，陰性特異性熒光探針12，其序列如序列表SEQ?ID?NO.12所示。3.根據(jù)權利要求2所述的檢測ADAMTS-5基因SNP位點突變的特異性引物及特異性探針，其特征在于，所述的陽性探針5’端標記VIC熒光，陰性探針5’端標記FAM熒光，陽性探針3’端和陰性探針3’端標有熒光淬滅基團BHQ-1；或者陰性探針5’端標記VIC熒光，陽性探針5’端標記FAM熒光，陽性探針3’端和陰性探針3’端標有熒光淬滅基團BHQ-1。4.權利要求2或3中任意一項所述的檢測ADAMTS-5基因SNP位點突變的特異性引物及特異性探針，在制備檢測腰椎間盤退變試劑盒中的用途。5.一種檢測腰椎間盤退變的熒光定量PCR試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有權利要求2所述的任意一組、或多組特異性引物及特異性探針。6.根據(jù)權利要求5所述的一種檢測腰椎間盤退變的熒光定量PCR試劑盒，還包括：熒光定量PCR?mix；含ADAMTS-5基因rs151058位點、rs162502位點和rs229052的突變和未突變的DNA標準品。7.一種非診斷目的的檢測ADAMTS-5基因rs151058位點、rs229052位點和/或rs162502位點的方法，具體包括以下步驟：A)對基因組DNA待測樣品在相同反應條件下分別加入陽性或陰性探針進行PCR擴增，監(jiān)測反應體系中熒光信號的變化；對于rs151058位點來說，PCR擴增過程中，使用的擴增引物序列如下：上游引物序列如序列表SEQ?ID?NO.1所示，下游引物序列如序列表SEQ?ID?NO.2所示；特異性探針序列如下：陽性特異性熒光探針序列如序列表SEQ?ID?NO.3所示，陰性特異性熒光探針序列如序列表SEQ?ID?NO.4所示；對于rs229052位點來說，PCR擴增過程中，使用的?擴增引物序列如下：上游引物序列如序列表SEQ?ID?NO.5所示，下游引物序列如序列表SEQ?ID?NO.6所示；特異性探針序列如下：陽性特異性熒光探針序列如序列表SEQ?ID?NO.7所示，陰性特異性熒光探針序列如序列表SEQ?ID?NO.8所示；對于rs162502位點來說，上游引物序列如序列表SEQ?ID?NO.9所示，下游引物序列如序列表SEQ?IDNO.10所示；特異性探針序列如下：陽性特異性熒光探針序列如序列表SEQ?ID?NO.11所示，陰性特異性熒光探針序列如序列表SEQ?ID?NO.12所示;B)根據(jù)濃度已知的標準樣品繪制標準曲線，其中橫坐標表示起始拷貝數(shù)的對數(shù)，縱坐標表示Ct值，Ct值為每個反應中的熒光信號到達預設域值時經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)，根據(jù)標準曲線與待測樣本的曲線進行模板初濃度的測定;C)根據(jù)標準曲線求取不同探針顯示的DNA初始反應拷貝數(shù)，求取每個探針的至少三個反應所得拷貝數(shù)的平均值，確定突變比例，該突變比例為陽性探針熒光顯示的拷貝數(shù)與兩種探針熒光顯示的拷貝數(shù)之和的比值；不同濃度的樣品測得的拷貝數(shù)不同，而同一樣品的突變比例是不變的，由此可確證樣本待檢測位點是否發(fā)生了突變。