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一種腰椎間盤退變相關SNP的檢測試劑盒

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-09-27
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請?zhí)?專利號 CN201310456540.6 
  • 技術(專利)名稱 一種腰椎間盤退變相關SNP的檢測試劑盒 
  • 項目單位 吳南
  • 發(fā)明人 吳南,邱貴興,吳志宏,陳俊,劉森,劉嘉琦,蘇新林,趙珞 
  • 行業(yè)類別 醫(yī)療器械-治療設備
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 衛(wèi)俊采
  • 發(fā)布時間 2021-09-27  
  • 01

    項目簡介

    本發(fā)明公開了一種腰椎間盤退變相關SNP的檢測試劑盒。該試劑盒包括以下成分:特異性引物、特異性探針、標準DNA模板、熒光定量PCR反應液。本發(fā)明還公開了一種檢測腰椎間盤退變相關SNP熒光定量PCR試劑盒的使用方法。利用該試劑盒可以快速定量檢測SNP位點的突變情況,從而預測腰椎間盤退變發(fā)生情況。本發(fā)明操作簡便、快速、結果穩(wěn)定、靈敏度高且特異性強。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種針對SNP位點檢測的試劑在制備檢測腰椎間盤退變試劑盒中的應用,其特征在于,所述SNP位點為以下位點的一個或多個,其在GeneBank中的編號分別為:rs151058、rs229052、rs162502;所述試劑為檢測SNP位點突變的特異性引物及特異性探針;所述特異性引物包括上游引物和下游引物,所述特異性探針包括陽性探針和陰性探針;對于rs151058來說,所述特異性引物及特異性探針分別為上游引物1其序列如序列表SEQ?ID?NO.1所示,下游引物2其序列如序列表SEQ?ID?NO.2所示,陽性特異性熒光探針3,其序列如序列表SEQ?ID?NO.3所示,陰性特異性熒光探針4,其序列如序列表SEQ?IDNO.4所示;對于rs229052來說,所述特異性引物及特異性探針分別為上游引物5其序列如序列表SEQ?ID?NO.5所示,下游引物6其序列如序列表SEQ?ID?NO.6所示,陽性特異性熒光探針7,其序列如序列表SEQ?ID?NO.7所示,陰性特異性熒光探針8,其序列如序列表SEQ?ID?NO.8所示;對于rs162502來說,所述特異性引物及特異性探針分別為上游引物9其序列如序列表SEQ?ID?NO.9所示,下游引物10其序列如序列表SEQ?ID?NO.10所示,陽性特異性熒光探針11,其序列如序列表SEQ?ID?NO.11所示,陰性特異性熒光探針12,其序列如序列表SEQ?ID?NO.12所示。2.一種檢測ADAMTS-5基因SNP位點突變的特異性引物及特異性探針,其特征在于,所述的特異性引物及特異性探針為3組,其中每組特異性引物包括上游引物和下游引物,特異性探針包括陽性探針和陰性探針;其中第一組特異性引物及特異性探針分別為上游引物1其序列如序列表SEQ?ID?NO.1所示,下游引物2其序列如序列表SEQ?ID?NO.2所示,陽性特異性熒光探針3,其序列如序列表SEQ?ID?NO.3所示,陰性特異性熒光探針4,其序列如序列表SEQ?ID?NO.4所示;其中第二組特異性引物及特異性探針分別為上游引物5其序列如序列表SEQ?ID?NO.5所示,下游引物6其序列如序列表SEQ?ID?NO.6所示,陽性特異性熒光探針7,其序列如序列表SEQ?ID?NO.7所示,陰性特異性熒光探針8,其?序列如序列表SEQ?IDNO.8所示;其中第三組特異性引物及特異性探針分別為上游引物9其序列如序列表SEQ?ID?NO.9所示,下游引物10其序列如序列表SEQ?ID?NO.10所示,陽性特異性熒光探針11,其序列如序列表SEQ?ID?NO.11所示,陰性特異性熒光探針12,其序列如序列表SEQ?ID?NO.12所示。3.根據(jù)權利要求2所述的檢測ADAMTS-5基因SNP位點突變的特異性引物及特異性探針,其特征在于,所述的陽性探針5’端標記VIC熒光,陰性探針5’端標記FAM熒光,陽性探針3’端和陰性探針3’端標有熒光淬滅基團BHQ-1;或者陰性探針5’端標記VIC熒光,陽性探針5’端標記FAM熒光,陽性探針3’端和陰性探針3’端標有熒光淬滅基團BHQ-1。4.權利要求2或3中任意一項所述的檢測ADAMTS-5基因SNP位點突變的特異性引物及特異性探針,在制備檢測腰椎間盤退變試劑盒中的用途。5.一種檢測腰椎間盤退變的熒光定量PCR試劑盒,其特征在于,所述試劑盒含有權利要求2所述的任意一組、或多組特異性引物及特異性探針。6.根據(jù)權利要求5所述的一種檢測腰椎間盤退變的熒光定量PCR試劑盒,還包括:熒光定量PCR?mix;含ADAMTS-5基因rs151058位點、rs162502位點和rs229052的突變和未突變的DNA標準品。7.一種非診斷目的的檢測ADAMTS-5基因rs151058位點、rs229052位點和/或rs162502位點的方法,具體包括以下步驟:A)對基因組DNA待測樣品在相同反應條件下分別加入陽性或陰性探針進行PCR擴增,監(jiān)測反應體系中熒光信號的變化;對于rs151058位點來說,PCR擴增過程中,使用的擴增引物序列如下:上游引物序列如序列表SEQ?ID?NO.1所示,下游引物序列如序列表SEQ?ID?NO.2所示;特異性探針序列如下:陽性特異性熒光探針序列如序列表SEQ?ID?NO.3所示,陰性特異性熒光探針序列如序列表SEQ?ID?NO.4所示;對于rs229052位點來說,PCR擴增過程中,使用的?擴增引物序列如下:上游引物序列如序列表SEQ?ID?NO.5所示,下游引物序列如序列表SEQ?ID?NO.6所示;特異性探針序列如下:陽性特異性熒光探針序列如序列表SEQ?ID?NO.7所示,陰性特異性熒光探針序列如序列表SEQ?ID?NO.8所示;對于rs162502位點來說,上游引物序列如序列表SEQ?ID?NO.9所示,下游引物序列如序列表SEQ?IDNO.10所示;特異性探針序列如下:陽性特異性熒光探針序列如序列表SEQ?ID?NO.11所示,陰性特異性熒光探針序列如序列表SEQ?ID?NO.12所示;B)根據(jù)濃度已知的標準樣品繪制標準曲線,其中橫坐標表示起始拷貝數(shù)的對數(shù),縱坐標表示Ct值,Ct值為每個反應中的熒光信號到達預設域值時經(jīng)歷的循環(huán)數(shù),根據(jù)標準曲線與待測樣本的曲線進行模板初濃度的測定;C)根據(jù)標準曲線求取不同探針顯示的DNA初始反應拷貝數(shù),求取每個探針的至少三個反應所得拷貝數(shù)的平均值,確定突變比例,該突變比例為陽性探針熒光顯示的拷貝數(shù)與兩種探針熒光顯示的拷貝數(shù)之和的比值;不同濃度的樣品測得的拷貝數(shù)不同,而同一樣品的突變比例是不變的,由此可確證樣本待檢測位點是否發(fā)生了突變。
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專利技術附圖

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