本發明涉及染色體缺失檢測領域，尤其涉及Y染色體微缺失多重實時熒光PCR檢測試劑盒。該試劑盒利用實時熒光PCR可以檢測Y染色體AZFa亞區sY84和sY86位點，Y染色體AZFb亞區sY127和sY134位點，Y染色體AZFc亞區sY254和sY255位點的基因缺失。該試劑盒采用同源加尾引物與通用引物實現穩定高效的多重PCR反應體系，并利用不同熒光基團標記的核酸探針指示目標片段的存在情況，從而實現最快兩管同時檢測6個AZF缺失熱點以及2個內控基因(SRY與ZFX/Y)上的序列。采用本發明所述試劑盒對男性Y染色體微缺失基因進行檢測，具有快速、準確、高通量、低成本、無污染等優點。

1.一種Y染色體微缺失多重實時熒光PCR檢測試劑盒，包括引物和熒光探針，其
特征在于：所述引物包括用于擴增Y染色體AZFa亞區sY84和sY86位點，Y染色體AZFb
亞區sY127和sY134位點，以及Y染色體AZFc亞區sY254和sY255位點的引物，所述
的引物通過同源加尾的方式抑制引物二聚體的產生，提高檢測靈敏度；所述引物中還包括
一通用引物，其中，引物包括：
特異性擴增Y染色體AZFa亞區sY84序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：1和
SEQ?ID?NO：2所示；
特異性擴增Y染色體AZFa亞區sY86序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：3和
SEQ?ID?NO：4所示；
特異性擴增Y染色體AZFb亞區sY127序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：5
和SEQ?ID?NO：6所示；
特異性擴增Y染色體AZFb亞區sY134序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：7
和SEQ?ID?NO：8所示；
特異性擴增Y染色體AZFc亞區sY254序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：9
和SEQ?ID?NO：10所示；
特異性擴增Y染色體AZFc亞區sY255序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：11
和SEQ?ID?NO：12所示；
特異性擴增男性特有SRY基因的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：13和SEQ?ID?NO：
14所示；
特異性擴增ZFX/Y基因的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：15和SEQ?ID?NO：16所
示；以及
通用引物序列，如SEQ?ID?NO：17所示；
上述所有序列可由其堿基互補序列替換；
熒光探針堿基序列如SEQ?ID?NO：18至SEQ?ID?NO：25所示。
2.根據權利要求1所述的Y染色體微缺失多重實時熒光PCR檢測試劑盒，其特征
在于：所述試劑盒采用至少兩種不同熒光基團標記的核酸探針在一個反應管內同時指示至
少兩個目標片段的存在情況，所述多種不同熒光基團包括任意發射波長不同的熒光基團的
組合。
3.根據權利要求2所述的Y染色體微缺失多重實時熒光PCR檢測試劑盒，其特征
在于：所述試劑盒采用至少四種不同熒光基團標記的核酸探針在一個反應管內同時指示四
個目標片段的存在情況。
4.根據權利要求1或2所述的Y染色體微缺失多重實時熒光PCR檢測試劑盒，其
特征在于所述試劑盒還包括實時熒光PCR反應所需試劑：MgCl₂、熱啟動Taq酶、UNG
酶、dATP、dCTP、dGTP、dUTP、熒光探針和PCR反應緩沖液。
5.根據權利要求4所述的Y染色體微缺失多重實時熒光PCR檢測試劑盒，其特征
在于所述的MgCl₂濃度為1.0～5.0mmol/L。
6.根據權利要求4所述的Y染色體微缺失多重實時熒光PCR檢測試劑盒，其特征
在于所述的dATP、dCTP、dGTP濃度均為50～400μmol/L，dUTP濃度為10～1000μmol/L。
7.根據權利要求4所述的Y染色體微缺失多重實時熒光PCR檢測試劑盒，其特征
在于所述實時熒光PCR檢測中每個反應管內包括用于擴增SRY基因、ZFX/Y基因中至少
一個基因的引物，通用引物，sY84、sY86、sY127、sY134、sY254、sY255靶點中至少一
個靶點的引物或引物組合，以及相應的熒光探針。