本發明涉及一種α-地中海貧血熒光定量PCR檢測試劑盒。該試劑盒包括用于檢測SEA、4.2和3.7型缺失的染料、用于擴增SEA、4.2和3.7型缺失的上游引物以及下游引物、PCR緩沖液和酶混合液。該試劑盒操作簡便，靈敏度高，并可預防PCR產物污染，具有很好的特異性、重復性和穩定性，利用該試劑盒進行α-地中海貧血熒光定量PCR檢測，可以確定外周血樣本中α-地中海貧血的缺失類型，可為靈敏、早期診斷α-地中海貧血缺失類型提供可靠的實驗證據。

1.一種α-地中海貧血熒光定量PCR檢測試劑盒，其包括3種PCR反應液，所述3種
PCR反應液中均含有用于靶多核苷酸擴增的引物，其中，
PCR反應液Ⅰ：含有源于人基因組16號染色體α1和α2基因的保守區域的用于檢測α-
地中海貧血SEA缺失的引物，且所述引物的序列為，
上游引物α-SEA-F：5’-TCAGCCACCCGCAGACCAAGACCTA-3’；
下游引物α-SEA-R：5’-AGACAGCGTCACCCTCAGAGCCAT-3’
PCR反應液Ⅱ：含有源于人基因組16號染色體α1基因的保守區域的用于檢測α-地中
海貧血3.7缺失的引物，且所述引物的序列為，
上游引物α-3.7-F：5’-GGGGTGTCACAGTGAACCACGACC-3’；
下游引物α-3.7-R：5’-GCCCCTGCCTTTTCCTACCCTATCC-3’；
PCR反應液Ⅲ：含有源于人基因組16號染色體α2基因的保守區域的用于檢測α-地中
海貧血4.2缺失的引物，且所述引物的序列為，
上游引物α-4.2-F：5’-GGCAGCCTTGGGCAACCTGTCTAC-3’；
下游引物α-4.2-R：5’-GGGCGGCTCCAGATTCAGACTCCT-3’。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述3種PCR反應液中均含有SYBR?
GREEN染料、PCR反應緩沖液、脫氧核糖核苷三磷酸、脫氧尿嘧啶核苷三磷酸及參比染
料。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，每種所述PCR反應液中含SYBR?
GREEN?I染料、10×PCR反應緩沖液、0.1～0.4mmol/L脫氧核糖核苷三磷酸、0.1～0.4
mmol/L脫氧尿嘧啶核苷三磷酸、40～200mmol/L參比染料以及0.2μmol/L～0.4μmol/L用
于靶多核苷酸擴增的上下游引物。
4.根據權利要求1～3中任意一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括酶
混合液和α-地中海貧血陰性對照。
5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述酶混合液包含濃度為1～5U/μl
的耐熱DNA聚合酶和濃度為0.05～0.2U/μl的尿嘧啶DNA糖基化酶。
6.根據權利要求1～3中任意一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括裂
解液、蛋白酶K溶液、吸附柱、漂洗液、緩沖液Ⅰ、緩沖液Ⅱ、緩沖液Ⅲ；其中，緩沖液
Ⅰ為緩沖液GB，緩沖液Ⅱ為緩沖液GD，緩沖液Ⅲ為緩沖液TB。