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一種用于2019-nCoV檢測的核酸組合物及其試劑盒與生產方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-12-22
  • 技術成熟度:詳情咨詢
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN202010452867.6 
  • 技術(專利)名稱 一種用于2019-nCoV檢測的核酸組合物及其試劑盒與生產方法 
  • 項目單位 南京黎明生物制品有限公司
  • 發明人 張樹文,葛斌文 
  • 行業類別 智慧健康-其他
  • 技術成熟度 詳情咨詢
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 朱虹佳
  • 發布時間 2021-12-22  
  • 01

    項目簡介

    本發明公開了一種用于2019?nCoV檢測的核酸組合物及其試劑盒與生產方法,涉及病毒體外核酸檢測技術領域。用于2019?nCoV檢測的核酸組合物為正向引物、反向引物及探針;用于2019?nCoV檢測的檢測試劑盒中包含該核酸組合物,還包括酶混合物和PCR MIX,該檢測試劑盒可制備成液態,也可制備成粉態;本發明中粉態的檢測試劑盒的生產方法包括混合和凍干步驟。本發明中的核酸組合物及試劑盒可對2019?nCoV基因序列上的ORF3中的目標基因進行特異性擴增,且檢測靈敏度高,還能夠對病毒的初始拷貝數進行準確定量,可廣泛用于2019?nCoV核酸檢測。
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  • 02

    說明書

    1.一種用于2019-nCoV檢測的核酸組合物,所述核酸組合物包括正向引物、反向引物和探針,其特征在于,所述正向引物的序列如SEQ ID NO.1所示;所述反向引物的序列如SEQ ID NO.2所示;所述探針的序列如SEQ ID NO.3所示;所述正向引物序列、反向引物序列及探針序列用于擴增ORF3基因SEQ ID NO.4上的目標基因SEQ ID NO.5;所述探針的5’端采用熒光報告基團修飾,所述探針的3’端采用熒光淬滅基團修飾。2.一種用于2019-nCoV檢測的檢測試劑盒,其特征在于,包括如權利要求1所述的正向引物、反向引物和探針,且所述正向引物、反向引物和探針獨立包裝,還包括酶混合物和PCRMIX。3.根據權利要求2所述的一種用于2019-nCoV檢測的檢測試劑盒,其特征在于,所述正向引物、反向引物及探針為液態,所述酶混合物和PCR MIX為液態,所述PCR MIX中包含有PCR緩沖液、陽離子及dNTPs。4.根據權利要求2所述的一種用于2019-nCoV檢測的檢測試劑盒,其特征在于,所述正向引物、反向引物和探針為液態,所述酶混合物和所述PCR MIX均為液態,檢測試劑盒內還包括液態的凍干保護劑,液態的核酸組合物、液態的酶混合物、液態的PCR MIX及液態的凍干保護劑混合后凍干形成凍干粉反應試劑置于檢測試劑盒內。5.根據權利要求3或4所述的一種用于2019-nCoV檢測的檢測試劑盒,其特征在于,所述酶混合物中包含有RNA酶抑制劑。6.根據權利要求3或4所述的一種用于2019-nCoV檢測的檢測試劑盒,其特征在于,檢測試劑盒內還包括陽性對照品,所述陽性對照品為含有目標基因序列的假病毒。7.根據權利要求3或4所述的一種用于2019-nCoV檢測的檢測試劑盒,其特征在于,所述酶混合物還包括DNA聚合酶和逆轉錄酶,所述DNA聚合酶選用熱啟動Taq酶,所述逆轉錄酶選自c-MMLV逆轉錄酶或AMV逆轉錄酶中的一種。8.根據權利要求3所述的一種用于2019-nCoV檢測的檢測試劑盒,其特征在于,所述PCR緩沖液選用Tris-HCl,所述Tris-HCl的pH=8.3。9.根據權利要求3所述的一種用于2019-nCoV檢測的檢測試劑盒,其特征在于,所述陽離子包括K+和Mg2+,所述正向引物和反向引物在PCR擴增反應體系中的終濃度為50~250nmol/mL;所述探針在PCR擴增反應體系中的終濃度為50~200nmol/mL;所述酶混合物中各組分在PCR擴增反應體系中的終濃度為105U/L 熱啟動Taq酶、4×106U/L 逆轉錄酶、8×105 U/L RNA酶抑制劑;所述PCR MIX各組分在PCR擴增反應體系中的終濃度為50 mM Tris-HCl、50 mM K+、3.5 mM Mg2+、0.2mM dNTPs 。10.如權利要求4所述的一種用于2019-nCoV檢測的檢測試劑盒的制備方法,其特征在于,包括如下步驟,S1:混合將液態的終濃度為50~250nmol/mL的所述正向引物和反向引物、終濃度為50~200nmol/mL的所述探針及液態的酶混合物、PCR MIX以及液態的終濃度為0.2M的凍干保護劑混勻,獲得反應混合液;S2:凍干將S1中的反應混合液凍干,獲得所述凍干粉反應試劑,所述凍干程序為:預冷凍,溫度-15℃,預冷凍時間1.5小時;升華,溫度-4℃,升華時間 0.5小時;解析干燥,溫度10℃,解析干燥時間0.5小時:加強干燥,溫度25℃,加強干燥時間0.5小時。
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