1.一種非治療非診斷性的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法，其特征在于，它包括步驟：
(a)在聚合酶反應(yīng)體系中進行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，從而獲得擴增產(chǎn)物，其中所述的反應(yīng)體
系中含有特異性擴增至少2種腦炎相關(guān)病毒的擴增產(chǎn)物的特異性引物集，其中所述的腦炎
相關(guān)病毒選自：森林腦炎病毒TBEV和日本腦炎病毒JEV，其中，所述的擴增腦炎相關(guān)病毒的
特異性引物集包括如下所示的引物：
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2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的反應(yīng)體系中含有特異性擴增以下5種
腦炎相關(guān)病毒的擴增產(chǎn)物的特異性引物集：東方馬腦炎病毒、西方馬腦炎病毒、委內(nèi)瑞拉馬
腦炎病毒、森林腦炎病毒和日本腦炎病毒，其中，所述的擴增腦炎相關(guān)病毒的特異性引物集
包括SEQ ID NO.:1-5所示的引物。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的反應(yīng)體系中還含有特異性擴增以下2
種腦炎相關(guān)病毒的擴增產(chǎn)物的特異性引物集：東方馬腦炎病毒、西方馬腦炎病毒，且所述的
擴增腦炎相關(guān)病毒的特異性引物集還包括如下所示的引物：
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4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的反應(yīng)體系中還含有特異性擴增以下3
種腦炎相關(guān)病毒的擴增產(chǎn)物的特異性引物集：東方馬腦炎病毒、西方馬腦炎病毒、委內(nèi)瑞拉
馬腦炎，且所述的擴增腦炎相關(guān)病毒的特異性引物集還包括如下所示的引物：
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5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述的擴增腦炎相關(guān)病毒的特異性引物集包
括SEQ ID NO.:1-5所示的引物。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，還包括步驟：
(b)對步驟1獲得的擴增產(chǎn)物用腦炎相關(guān)病毒的特異性探針進行檢測；其中，所述特異
性探針選自下組：SEQ ID NO.:7-11所示的序列。
7.如權(quán)利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于，所述引物的5’末端標(biāo)記生物素。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述的特異性探針帶有可檢測標(biāo)記。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述的可檢測標(biāo)記包括：熒光團、熒光微球。
10.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟(b)還包括使用作為陰性對照的探
針，所述的陰性探針選自下組：SEQ ID NO.:6所示的序列。
11.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟(b)中用Luminex xMAP進行檢測。
12.如權(quán)利要求6所示的方法，其特征在于，所述的探針的5’端或3’端具有NH
2-間隔臂；
或者所述的探針通過“-NH-間隔臂”結(jié)合于微球或固相載體。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述的間隔臂選自下組：
(i)連續(xù)的脫氧胸腺嘧啶核苷即(dT)n，n＝10-15；
(ii)烷基鏈-(CH
2)m-，m＝6-12；和
(iii)乙二醇己醚(HEG)。
14.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟(b)中，先進行擴增產(chǎn)物與探針的雜
交反應(yīng)，雜交完成后加入標(biāo)記了藻紅蛋白(PE)的鏈親和素(streptavidin，SA)，最終形成微
球-探針-PCR產(chǎn)物-生物素-SA-PE復(fù)合物。
15.一種引物集，其特征在于，所述的引物集可特異性擴增至少2種腦炎相關(guān)病毒的擴
增產(chǎn)物，其中所述的腦炎相關(guān)病毒選自：森林腦炎病毒TBEV和日本腦炎病毒JEV，其中，所述
的擴增腦炎相關(guān)病毒的特異性引物集包括如下所示的引物：
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16.如權(quán)利要求15所述的引物集，其特征在于，所述的引物集還特異性擴增以下2種腦
炎相關(guān)病毒的擴增產(chǎn)物：東方馬腦炎病毒、西方馬腦炎病毒，且所述的擴增腦炎相關(guān)病毒的
特異性引物集還包括如下所示的引物：
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17.如權(quán)利要求15所述的引物集，其特征在于，所述的引物集還特異性擴增以下3種腦
炎相關(guān)病毒的擴增產(chǎn)物：東方馬腦炎病毒、西方馬腦炎病毒、委內(nèi)瑞拉馬腦炎，且所述的擴
增腦炎相關(guān)病毒的特異性引物集還包括如下所示的引物：
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18.如權(quán)利要求17所述的引物集，其特征在于，所述的擴增腦炎相關(guān)病毒的特異性引物
集包括SEQ ID NO.:1-5所示的引物。
19.一種檢測試劑盒，其特征在于，它包括：第一容器以及位于所述容器內(nèi)權(quán)利要求15-
18中任一所述的引物集。
20.如權(quán)利要求19所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括使用說明書。
21.如權(quán)利要求19所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括：第二容器以及位
于所述容器內(nèi)的核酸探針；其中，所述探針選自下組：SEQ ID NO.:7-11所示的序列。
22.如權(quán)利要求21所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述的探針是針對東方馬腦炎病
毒、西方馬腦炎病毒、委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒、森林腦炎病毒和日本腦炎病毒的特異性探針。
23.如權(quán)利要求21所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括可以被引物組合
擴增但內(nèi)部序列為其它非相關(guān)病毒的外源核酸片段，以及包被有可以與這個外源核酸片段
良好雜交的探針的微球，作為內(nèi)參。
24.如權(quán)利要求15-18中任一所述的引物集的用途，其特征在于，用于制備檢測腦炎相
關(guān)病毒的試劑盒。
25.如權(quán)利要求24所述的引物集的用途，其特征在于，所述的腦炎相關(guān)病毒包括東方馬
腦炎病毒、西方馬腦炎病毒、委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒、森林腦炎病毒和日本腦炎病毒。
26.權(quán)利要求25所述的引物集的用途，其特征在于，所述的試劑盒用于同時檢測5種腦
炎相關(guān)病毒。
27.一種權(quán)利要求15-18任一所述的引物集或權(quán)利要求19所述的試劑盒的用途，其特征
在于，它們用于體外非診斷地檢測樣品中是否存在腦炎相關(guān)病毒。
28.如權(quán)利要求27所述的用途，其特征在于，用于檢測在環(huán)境樣品是否存在腦炎相關(guān)病
毒。
