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多重PCR檢測七種腹瀉病毒用引物組和試劑盒及其檢測方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2021-09-05
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201610601303.8 
  • 技術(專利)名稱 多重PCR檢測七種腹瀉病毒用引物組和試劑盒及其檢測方法 
  • 項目單位 國家食品安全風險評估中心
  • 發明人 吳永寧,郭云昌,李薇薇,王曉艷,王雷,張志強 
  • 行業類別 健康產品質檢-質量檢驗
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 吳瀟雪
  • 發布時間 2021-09-05  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供了多重PCR檢測七種腹瀉病毒用引物組,其中,該引物組包括SEQ ID NO.1和3?16所示的引物。本發明還提供了一種多重PCR檢測7種腹瀉病毒的試劑盒,所述試劑盒包括本發明所述的多重PCR引物組、逆轉錄酶和DNA聚合酶。通過上述技術方案本發明顯著地提高了對七種腹瀉病毒同時進行檢測的敏感性、特異性和簡便性。
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  • 02

    說明書

    1.一種多重PCR檢測七種腹瀉病毒用引物組,其中,該引物組包括SEQ ID NO.1和3-16所示的引物;所述七種腹瀉病毒包括輪狀病毒A組、諾如病毒GI型、諾如病毒GII型、札如病毒、星狀病毒、腸道腺病毒和博卡病毒。2.根據權利要求1所述的引物組,其中,所述引物組還包括SEQ ID NO.17-18所示的引物。3.用于非診斷目的的七種腹瀉病毒的檢測方法,其特征在于,該方法包括如下步驟;(1)提取待測樣本的總核酸;(2)對所述總核酸進行逆轉錄獲得PCR模板;用權利要求1或2所述的引物組對所述PCR模板進行多重PCR擴增,獲得多重PCR擴增后的物料;(3)對所述多重PCR擴增后的物料進行核酸電泳檢測,得到核酸電泳檢測的結果;如果核酸電泳檢測的結果顯示所述多重PCR擴增后的物料中含有139bp的擴增產物,則指示所述待測樣本中含有輪狀病毒A組;如果核酸電泳檢測的結果顯示所述多重PCR擴增后的物料中含有364bp的擴增產物,則指示所述待測樣本中含有諾如病毒GI型;如果核酸電泳檢測的結果顯示所述多重PCR擴增后的物料中含有487bp的擴增產物,則指示所述待測樣本中含有諾如病毒GII型;如果核酸電泳檢測的結果顯示所述多重PCR擴增后的物料中含有415bp的擴增產物,則指示所述待測樣本中含有札如病毒;如果核酸電泳檢測的結果顯示所述多重PCR擴增后的物料中含有282bp的擴增產物,則指示所述待測樣本中含有星狀病毒;如果核酸電泳檢測的結果顯示所述多重PCR擴增后的物料中含有200bp的擴增產物,則指示所述待測樣本中含有腸道腺病毒;如果核酸電泳檢測的結果顯示所述多重PCR擴增后的物料中含有166bp的擴增產物,則指示所述待測樣本中含有博卡病毒。4.根據權利要求3所述的檢測方法,其中,SEQ ID NO.3-16所示的引物的最終使用濃度各自為0.1-0.8μM,SEQ ID NO.1所示的引物的最終使用濃度為0.4-0.8μM。5.根據權利要求3或4所述的檢測方法,其中,步驟(2)的反應條件包括如下a-i的程序:a:49-51℃,28-32min;b:94-96℃,13-18min;c:94-96℃,28-32s,d:54-56℃,28-32s,e:71-73℃,58-62s,進行10個c-e的循環;f:94-96℃,28-32s,g:49-51℃,28-32s,h:71-73℃,59-61s,進行30個f-h的循環;i:71-73℃,5-10min。6.根據權利要求3-5中任意一項所述的檢測方法,其中,所述核酸電泳檢測包括核酸凝膠電泳和/或核酸毛細管電泳。7.一種多重PCR檢測七種腹瀉病毒的試劑盒,其特征在于,該試劑盒包括權利要求1或2所述的多重PCR引物組、逆轉錄酶和DNA聚合酶;所述七種腹瀉病毒包括輪狀病毒A組、諾如病毒GI型、諾如病毒GII型、札如病毒、星狀病毒、腸道腺病毒和博卡病毒。8.根據權利要求7所述的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還包括PCR反應緩沖液和dNTP。9.權利要求1或2所述的引物組在制備檢測七種腹瀉病毒的試劑盒中的用途;其中,所述七種腹瀉病毒包括輪狀病毒A組、諾如病毒GI型、諾如病毒GII型、札如病毒、星狀病毒、腸道腺病毒和博卡病毒。
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專利技術附圖

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