本發明公開了一種檢測污染水體中人糞的PCR試劑盒及其檢測方法，屬于水體污染檢測領域。一種檢測污染水體中人糞的PCR試劑盒，包括4種巢式PCR引物、dNTP、PCR？buffer、Mg和ddHO，使用兩輪PCR擴增，巢式PCR引物SHF1、SHR1的檢測閾值為0.916pg/ul人糞DNA，巢式PCR引物NHF1、NHR1的檢測閾值為0.057pg/ul人糞DNA，在第一輪PCR擴增后未檢測出污染時，可以進行第二輪PCR擴增。通過PCR手段檢測水體人線粒體DNA來判斷糞便污染，具有良好的特異性，降低了對檢測樣本的誤判，可以實現快速、準確地檢測水體中的微量人糞污染。

1.一種檢測污染水體中人糞的PCR試劑盒，包括4種巢式PCR引物、dNTP、PCRbuffer、
Mg²⁺和ddH₂O，其特征在于：所述的4種巢式PCR引物為：
SHF1：5’-CCCGTTCCAGTGAGTTCACC-3’；
SHR1：5’-AAGCTGTGGCTCGTAGTGTTC-3’；
NHF1：5’-CACGGGAAACAGCAGTGATTAAC-3’；
NHR1：5’-TCCCAGTTTGGGTCTTAGCTATTG-3’；
所述的PCRbuffer為10×PCRbuffer，所述的巢式PCR引物SHF1、SHR1的檢測閾值為
0.916pg/ul人糞DNA，巢式PCR引物NHF1、NHR1的檢測閾值為0.057pg/ul人糞DNA。
2.采用權利要求1中所述的PCR試劑盒檢測污染水體中人糞的檢測方法，其步驟為：
(1)從待測水樣中提取DNA作為模板；
(2)進行第一輪PCR擴增：2.5ul的10×PCRbuffer；2.5uldNTP；2ulMg²⁺；0.5ul濃度為
10umol/L上、下游引物SHF1、SHR1；2ul模板DNA；滅菌ddH₂O補足至25ul；
反應條件為95℃，預變性3min；95℃15s，62℃15s，72℃45s，40個循環；72℃7min，
4℃保存；
(3)檢驗PCR擴增產物：5ulPCR產物在1％瓊脂糖凝膠上電泳，1×TAE作為電泳緩
沖液，用EB染色，在紫外燈下觀測，若存在453bp的條帶，則表明水體受到了人糞污染；
若不存在，則進行下一步驟；
(4)以步驟(2)的PCR擴增產物為模板，進行第二輪PCR擴增，2.5ul的10×PCRbuffer；
2.5uldNTP；2ulMg²⁺；0.5ul濃度為10umol/L上、下游引物NHF1、NHR1；2ul第一輪PCR擴
增產物；滅菌ddH₂O補足至25ul；
反應條件為95℃，預變性3min；95℃15s，61℃15s，72℃45s，40個循環；72℃7min，
4℃保存；
(5)檢驗第二輪PCR擴增產物：5ulPCR擴增產物在1％瓊脂糖凝膠上電泳，1×TAE
作為電泳緩沖液，用EB染色，在紫外燈下觀測，若存在270bp的條帶，則表明水體受到了
人糞污染；若不存在，則表明水體未受到人糞污染。
3.根據權利要求2所述的采用PCR試劑盒檢測污染水體中人糞的檢測方法，其特征在于：
所述的步驟(3)和步驟(5)中1％瓊脂糖凝膠電泳，電泳條件為：電壓120V，電流440mA，
時間25min。