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一種快速鑒別龍魚種類的多重PCR試劑盒及其鑒別方法

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-02-15
  • 技術成熟度:已有樣品
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN201611043139.X 
  • 技術(專利)名稱 一種快速鑒別龍魚種類的多重PCR試劑盒及其鑒別方法 
  • 項目單位 廈門海關技術中心
  • 發明人 郭書林,陳信忠,龔艷清,楊俊萍,孔繁德,吳山楠 
  • 行業類別 中藥材獲取-動植物采集
  • 技術成熟度 已有樣品
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 尤海研
  • 發布時間 2022-02-15  
  • 01

    項目簡介

    本發明提供一種快速鑒別龍魚種類的PCR試劑盒及方法,所述試劑盒包括:1、3條上游引物和3條下游引物;2、陽性對照品;3、PCR反應液;同時,還提供了一種快速鑒別龍魚種類的方法,1)選擇3條上游引物和3條下游引物;2)制備基因組DNA模板;3)分別在陽性對照的DNA模板和待檢龍魚制備的基因組DNA模板中添加所述上游引物和下游引物進行PCR擴增反應;4)取擴增后的產物5μL點樣于2.5%瓊脂糖凝膠以50bp Marker(條帶50、100、150、200、250、300、350、400、450、500)為標準分子參照,進行電泳;電泳結果用紫外凝膠成像系統分析;5)結果判定。本發明不僅提高鑒別效率,節約時間,而且節省鑒別成本。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種快速鑒別龍魚種類的多重PCR試劑盒,包括:(1)、3條上游引物和3條下游引物;(2)、陽性對照品;(3)、PCR反應液;其中,所述的3條上游引物和3條下游引物的序列分別為:上游引物SF-For:5-CCTATGTACTCACCACCCTAATC-3;下游引物SF-Rev:5'-CTCCTAGGGTAGTGAGAAGGGC-3';上游引物OB-For:5'-CATATTTCTTAAGGTACTCTG-3';下游引物OB-Rev:5'-GAATAGCACACCGGTGTAGGAT-3';上游引物SJ-For:5'GCCTGCTACTGCAGTTGTAGTT 3';下游引物SJ-Rev-3:5'-GAAAGTCAGGATTATGAAGAT-3';其中所述的PCR反應液的成分為: 2.根據權利要求1所述的一種快速鑒別龍魚種類的多重PCR試劑盒,其特征在于,其中所述擴增緩沖液為在25℃,pH值為8.8的100mMTris-HCl;500mM KCl,體積比為0.8%Nonidet P40。3.根據權利要求1所述的一種快速鑒別龍魚種類的多重PCR試劑盒,其特征在于,其中所述的4種dNTP混合物指:三磷酸腺嘌呤脫氧核苷酸dATP,脫氧胸苷三磷酸dTTP,脫氧鳥苷三磷酸三鈉dGTP,脫氧胞苷三磷酸dCTP。4.根據權利要求1所述的一種快速鑒別龍魚種類的多重PCR試劑盒,其特征在于,其中所述的陽性對照品為:3種龍魚即亞洲龍魚、銀龍魚和珍珠龍魚的線粒體DNA質粒標準品。5.一種快速鑒別龍魚種類的鑒別方法,其特征在于,包括權利要求1~4中任一項所述的快速鑒別龍魚種類的多重PCR試劑盒,所述方法為:1)選擇3條上游引物和3條下游引物;2)取陽性對照品和待檢龍魚樣本分別制備基因組DNA模板;3)分別在陽性對照的DNA模板和待檢龍魚制備的基因組DNA模板中添加所述上游引物和下游引物進行PCR擴增反應;4)取擴增后的產物5μL點樣于2.5%瓊脂糖凝膠,其中含0.1~0.5μg/mL溴化乙錠,以50bp Marker為標準分子參照,進行電泳;電泳結果用紫外凝膠成像系統分析;5)結果判定,將待檢樣品與陽性對照電泳結果進行比對,確定龍魚種類。6.根據權利要求5所述的一種快速鑒別龍魚種類的鑒別方法,其特征在于,其中所述的PCR擴增反應按如下條件進行: 7.根據權利要求5所述的一種快速鑒別龍魚種類的鑒別方法,其特征在于,其中所述的待檢龍魚DNA模板制備的方法為:a.取龍魚組織,加入400μl裂解液混勻,置于37℃水浴1h;b.然后加入200μl 5mol/L的氯化鈉溶液,混勻后進行離心,離心條件13000rpm、15min;c.取上清液,用苯酚抽提2次,氯仿抽提1次;d.加兩倍體積無水乙醇,1/10體積、3mol/L、pH8.0的醋酸鉀,-20℃保存1h;e.對上述溶液進行離心,離心條件13000rpm、15min棄上清液,沉淀物用70%乙醇洗2次;f.置于室溫干燥后,溶于50μlTE溶液中,置4℃保存備用。8.根據權利要求7所述的一種快速鑒別龍魚種類的鑒別方法,其特征在于,其中所述的裂解液配方為:40mmol/L Tris-醋酸,20mmol/L醋酸鈉,1mmol/L EDTA,1%十二烷基硫酸鈉,pH7.8。
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