本發明屬于特定基因檢測領域，具體涉及一種早期非小細胞肺癌多位點關聯基因的引物、探針、試劑盒及其制備方法和檢測方法。本發明針對非小細胞肺癌的早期檢測與之相關聯的EGFR，CHRNA3，CHRNA5及ERCC1基因內部的rs2239680,rs16969968,rs12910984及rs2298881位點的基因型進行分型，利用以上4個位點聯合作為非小細胞肺癌早期診斷的標志物，提高了檢測的真實性和準確性。本發明檢測樣本的檢測周期短、取材方便，能夠滿足高通量地大規模的檢測，提高了檢測效率。

1.一種檢測肺癌多位點關聯基因的多重PCR引物，其特征在于：所述的引物的核苷酸堿基序列如序列表中?SEQ?ID?No：1、SEQ?ID?No：2、SEQ?ID?No：6、SEQ?ID?No：7、SEQ?ID?No：11、SEQ?ID?No：12、SEQ?ID?No：16、SEQ?ID?No：17所示；以上引物中，核苷酸堿基序列如序列表中SEQ?ID?No：1、SEQ?ID?No：2的序列為一組；核苷酸堿基序列如序列表中SEQ?ID?No：6、SEQ?ID?No：7的序列為一組；核苷酸堿基序列如序列表中SEQ?ID?No：11、SEQ?ID?No：12的序列為一組；核苷酸堿基序列如序列表中SEQ?ID?No：16、SEQ?ID?No：17的序列為一組。2.一種檢測肺癌多位點關聯基因的多重PCR探針，其特征在于：所述的探針包括5’端探針和3’端探針；所述的5’端探針的核苷酸堿基序列如序列表中?SEQ?ID?No：3、SEQ?ID?No：4、SEQ?ID?No：8、SEQ?IDNo：9、SEQ?ID?No：13、SEQ?ID?No：14、SEQ?ID?No：18、SEQ?ID?No：19所示；所述的3’端探針的核苷酸堿基序列如序列表中SEQ?ID?No：5、SEQ?ID?No：10、SEQ?ID?No：15、SEQ?ID?No：20所示，所述的3’端探針的核苷酸堿基序列的?5’端添加磷酸修飾，?3’端加入熒光FAM修飾；以上探針中，核苷酸堿基序列如序列表中SEQ?ID?No：3、SEQ?ID?No：4、SEQ?ID?No：5的序列為一組；核苷酸堿基序列如序列表中SEQ?ID?No：8、SEQ?ID?No：9?、SEQ?ID?No：10的序列為一組；核苷酸堿基序列如序列表中SEQ?ID?No：13、SEQ?ID?No：14、SEQ?ID?No：15的序列為一組；核苷酸堿基序列如序列表中SEQ?ID?No：18、SEQ?ID?No：19、SEQ?ID?No：20的序列為一組。3.一種檢測肺癌多位點關聯基因的試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒由?A體系和?B體系組成；所述的A體系包括：PCR鎂離子緩沖液，dNTP，Taq?DNA聚合酶、引物、ddH₂O；所述的?PCR鎂離子緩沖液由2.5mmol/L?MgCl₂，500mmol/L?KCL，100mmol/L?Tris-HCl?PH8.3組成，所述PCR鎂離子緩沖液中鎂離子的濃度為2.5mM，所述的Taq?DNA聚合酶濃度是?2.5unit/μl；所述的引物為權利要求1所述的檢測肺癌多位點關聯基因的多重PCR引物；所述的?B體系包括：1×連接酶緩沖液，dNTP，Taq?DNA連接酶、探針，ddH₂O；所述的探針包括?3’端探針和5’端探針；?所述的1×連接酶緩沖液由10mM?Tris-HCl，PH8.0，NaCl?3mol/L，60mmol/L?MgCl₂?組成，所述1×連接酶緩沖液的濃度是5mM，所述的?Taq?DNA連接酶濃度是?2.5unit/μl；所述的探針為權利要求2所述的檢測肺癌多位點關聯基因的多重PCR探針；所述試劑盒的制備方法包括以下步驟：A、采用引物設計軟件設計所述的引物，Tm值分別為?55攝氏度、50攝氏度、60攝氏度、62攝氏度；再合成所述的引物；B、采用探針設計軟件設計所述的探針，再進行合成和修飾，得到所述的探針；C、分別配制：A體系中的?PCR鎂離子緩沖液、dNTP、Taq?DNA聚合酶；B體系中的1×連接酶緩沖液、dNTP、Taq?DNA連接酶；D、將所述的?A體系、B體系進行分裝處理，得到所述的試劑盒。