本發(fā)明公開了一種咽拭子標本手足口病CoxA16病毒real-timeRT-PCR檢測試劑盒及其非診斷性檢測方法，其引物和探針序列如下:CA16FP：5’-CCCATCTGTGTTTGTGAAAATGAC-3’；CA16RP：5’-GGTATGCACTRGCTGGTGACA-3’；CA16P：5’-CCCNCCRGCTCAAGTGTCAGTCCC-3’；本發(fā)明能夠方便了臨床醫(yī)生和口岸檢疫工作者采樣操作，具有成本低、檢測周期短，能夠提供有效和臨床診斷和流行病監(jiān)測數(shù)據(jù)。探針實時熒光PCR檢測腸道病毒COXA16方法特異性高、重復(fù)性好、靈敏度高，可以廣泛應(yīng)用于臨床和口岸手足口病的診斷和檢測。

1.一種咽拭子標本手足口病Cox?A16病毒real-time?RT-PCR檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括用于檢測病毒的引物和探針序列，其中引物和探針序列如下:CA16FP：5’-CCCATCTGTGTTTGTGAAAATGAC-3’；CA16RP：5’-GGTATGCACTRGCTGGTGACA-3’；CA16P：5’-CCCNCCRGCTCAAGTGTCAGTCCC-3’。2、?一種手足口病COX?A16病毒real-time?RT-PCR非診斷性檢測方法，其特征在于，該方法具體為：1）根據(jù)COX?A16病毒基因序列，設(shè)計引物和探針序列如下:CA16FP：5’-CCCATCTGTGTTTGTGAAAATGAC-3’；CA16RP：5’-GGTATGCACTRGCTGGTGACA-3’；CA16P：5’-CCCNCCRGCTCAAGTGTCAGTCCC-3’；2）提取待測樣品RNA;3）以待測樣品RNA為模板，在包括步驟1)所述引物和探針序列的RT?PCR反應(yīng)體系中進行RT?PCR反應(yīng);4）采用實時PCR檢測儀進行PCR擴增及結(jié)果分析，通過熒光定量檢測，根據(jù)熒光檢測的Ct值閾值和最高熒光強度判斷結(jié)果，熒光RT?PCR反應(yīng)呈陽性，則待測樣品含有COX?A16病毒核酸。3、?如權(quán)利要求2所述的非診斷性檢測方法，其特征在于，所述RT?PCR反應(yīng)體系為：2×One?Step?RT-PCR?Buffer?Ⅲ?12.5μl，TaKaRa?Ex?Taq??HS?5?U/μl?0.5μl，PrimeScript??RT?Enzyme?Mix?Ⅱ0.5?μl，RNase?Free?dH2O?4.5?μl，ROX?Reference?Dye?II?50×0.5μl，Primer?40μmol/L?各0.5μl，Probe?10μmol/L?0.5?μl，模板5μl，反應(yīng)體系共計25μl。4、?如權(quán)利要求2所述的非診斷性檢測方法，其特征在于，所述RT?PCR反應(yīng)的反應(yīng)條件為：42℃，8?min；95℃，10?s；95℃，5s，59℃，34s，45?Cycles；退火溫度按54℃、55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃分別試驗優(yōu)化，退火溫度為59℃時，反應(yīng)曲線呈典型的S型，熒光信號最強，本方法選擇59℃作為退火溫度進行所述RT?PCR反應(yīng)。?