1.一組用于同步檢測鑒別豬圓環病毒2型(PCV-2)、豬偽狂犬病病毒(PRV)和
豬細小病毒(PPV)的核酸擴增方法使用的引物，其特征在于，其組成為：
含修飾堿基的共有引物對，共有引物對的核苷酸序列分別如序列表SEQ?ID?
No.1和SEQ?ID?No.2所示，其中引物SEQ?ID?No.1距5′端第4、8、11位的堿基
為鎖核酸修飾堿基、引物SEQ?ID?No.2距5′端第4、7、10位的堿基為鎖核酸修
飾堿基；
檢測豬圓環病毒2型特異的引物對，上游引物和下游引物的核苷酸序列分別
如SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.4所示；
檢測豬偽狂犬病病毒特異的引物對，上游引物和下游引物的核苷酸序列分別
如SEQ?ID?No.6和SEQ?ID?No.7所示；
檢測豬細小病毒特異的引物對，上游引物和下游引物的核苷酸序列分別如
SEQ?ID?No.9和SEQ?ID?No.10所示。
2.一組用于檢測及鑒別豬圓環病毒2型、豬偽狂犬病病毒和豬細小病毒的核
酸擴增方法中使用的核酸，其特征在于，該組核酸包括：
核苷酸序列如SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示的共有引物序列；
核苷酸序列如SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.4所示檢測豬圓環病毒2型的序列和
作為陽性對照含有豬圓環病毒2型陽性擴增產物如SEQ?ID?No.5所示的序列；
核苷酸序列如SEQ?ID?No.6和SEQ?ID?No.7所示檢測豬偽狂犬病病毒的序列和
作為陽性對照含有豬偽狂犬病病毒陽性擴增產物如SEQ?ID?No.8所示的序列；
核苷酸序列如SEQ?ID?No.9和SEQ?ID?No.10所示檢測豬細小病毒的序列和作
為陽性對照含有豬細小病毒陽性擴增產物如SEQ?ID?No.11所示的序列。
3.一種同步檢測豬圓環病毒2型、豬偽狂犬病病毒和豬細小病毒三種豬病毒
的核酸擴增非診斷性方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：
(1)從樣品中提取病毒核酸；
(2)對提取的核酸進行PCR擴增，其中
PCR擴增反應體系采用40μL體系：
共有引物序列如SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示，其中引物SEQ?ID?No.1距
5′端第4、8、11位的堿基為鎖核酸修飾堿基、引物SEQ?ID?No.2距5′端第4、7、
10位的堿基為鎖核酸修飾堿基，終濃度各為250nmol/L；
檢測豬圓環病毒2型的特異性引物，上下游序列如SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.4
所示，其終濃度各為12.5nmol/L；
檢測豬偽狂犬病病毒的特異性引物，上下游序列如SEQ?ID?No.5和SEQ?ID?
No.6所示，其終濃度各為2.5nmol/L；
檢測豬細小病毒的特異性引物，上下游序列如SEQ?ID?No.9和SEQ?ID?No.10
所示，其引物終濃度各為2.5nmol/L；
Mg2+終濃度1.5mmol/L；
dNTP終濃度200μmol/L；
PCR緩沖液；
Taq聚合酶用量1-2unit；
模板1-5μL，用滅菌雙蒸水補足總體積為40μL；
PCR擴增反應條件：
94℃預變性2分鐘；第一步循環反應：94℃變性20秒，60℃退火30秒，72℃
延伸30秒，共進行10個循環；接著進行第二步循環反應：94℃變性20秒，70℃
退火10秒，72℃延伸30秒，共進行30個循環；最后72℃延伸1分鐘；
(3)對擴增產物進行電泳：陰性對照為滅菌生理鹽水；陽性對照為分別攜帶
有如序列表SEQ?ID?No.5、SEQ?ID?No.8、SEQ?ID?No.11所示序列的DNA；
(4)分析、判定結果：樣品的擴增條帶與陽性對照的擴增條帶位置一致，且
陰性對照無相應的擴增條帶，則樣品為陽性。
4.一種同步檢測及鑒別豬圓環病毒2型、豬偽狂犬病病毒和豬細小病毒三
種豬病毒的核酸擴增試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：
PCR緩沖液；
共有引物對，核苷酸序列如SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示，引物SEQ?ID?
No.1距5′端第4、8、11位的堿基為鎖核酸修飾堿基，引物SEQ?ID?No.2距5′
端第4、7、10位的堿基為鎖核酸修飾堿基；
檢測豬圓環病毒2型的引物，核苷酸序列如SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.4所示；
檢測豬偽狂犬病病毒的引物，核苷酸序列如SEQ?ID?No.6和SEQ?ID?No.7所示；
檢測豬細小病毒的引物，核苷酸序列如SEQ?ID?No.9和SEQ?ID?No.10所示；
dNTP；
MgCl2；
Taq?DNA聚合酶；
滅菌雙蒸水；
陰性對照：滅菌生理鹽水；
陽性對照：攜帶有擴增產物序列的DNA，所述擴增產物的核苷酸序列如SEQ?
ID?No.5、SEQ?ID?No.8和SEQ?ID?No.11所示。
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