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熒光分子修飾的納米銀探針及其試劑盒與在檢測(cè)人IgE中的應(yīng)用

  • 專利類型:發(fā)明專利
  • 有效期:不限
  • 發(fā)布日期:2021-09-28
  • 技術(shù)成熟度:已有樣品
交易價(jià)格: ¥面議
  • 法律狀態(tài)核實(shí)
  • 簽署交易協(xié)議
  • 代辦官方過(guò)戶
  • 交易成功

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  • 技術(shù)(專利)類型 發(fā)明專利
  • 申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào) CN201210302369.9 
  • 技術(shù)(專利)名稱 熒光分子修飾的納米銀探針及其試劑盒與在檢測(cè)人IgE中的應(yīng)用 
  • 項(xiàng)目單位 南京大學(xué)
  • 發(fā)明人 許丹科,李慧,魏霞,羌維兵,李鐘卉 
  • 行業(yè)類別 醫(yī)療器械-治療設(shè)備
  • 技術(shù)成熟度 已有樣品
  • 交易價(jià)格 ¥面議
  • 聯(lián)系人 尤漢芬
  • 發(fā)布時(shí)間 2021-09-28  
  • 01

    項(xiàng)目簡(jiǎn)介

    本發(fā)明公開(kāi)了一種熒光分子修飾的納米銀探針。納米銀探針以直徑為10~30nm的納米銀球?yàn)閮?nèi)核,銀球外表面鍵合有熒光分子鏈和適配體鏈。本發(fā)明還公開(kāi)了包含上述探針的試劑盒與在檢測(cè)人IgE中的應(yīng)用。本發(fā)明的納米銀探針耦合熒光增強(qiáng)液的方法能大大提高熒光檢測(cè)的靈敏度,檢測(cè)人IgE的線性范圍寬從0.5ng/ml至10μg/ml,檢測(cè)限低,特異性好。此種納米銀探針的合成及修飾方法成熟,熒光增強(qiáng)液廉價(jià)易得,兩者的聯(lián)合可以使檢測(cè)人IgE的靈敏度大大提高。此種信號(hào)放大的方法為蛋白質(zhì)標(biāo)志物的熒光分析檢測(cè)提供了一種極好的方法。
    展開(kāi)
  • 02

    說(shuō)明書(shū)

    1.一種熒光分子修飾的納米銀探針,其特征在于,它以直徑為10~30nm的納米銀
    球?yàn)閮?nèi)核,銀球外表面鍵合有熒光分子鏈和適配體鏈;
    其中,所述的熒光分子鏈為5’-SH-AAAAA?AAAAA?AAAAA?AAAAA?AAAA-Cy5;
    其中,所述的適配體鏈為:5’-SH-AAAAA?AAAAA?AAAAA?GGGGC?ACGTT?TATCC?
    GTCCC?TCCTA?GTGGC?GTGCC?CC。
    2.權(quán)利要求1所述的熒光分子修飾的納米銀探針的制備方法,其特征在于,它包
    括如下步驟:
    (1)在冰浴條件下,將2-20mmol/L硝酸銀溶液逐滴加入至3-30mmol/L硼氫化鈉溶
    液中,硝酸銀與硼氫化鈉的反應(yīng)摩爾比為1:3,不斷攪拌至反應(yīng)完全,然后補(bǔ)加硼氫化
    鈉溶液,補(bǔ)加的硼氫化鈉的摩爾量為上述參與反應(yīng)的硼氫化鈉的摩爾量的7%,繼續(xù)攪
    拌至室溫,得到納米銀溶液;
    (2)將熒光分子鏈和適配體鏈按摩爾比(1~99):(1~9)加入步驟(1)得到的納米銀溶液
    中,靜置10~24小時(shí),熒光分子鏈和適配體鏈的總摩爾量與納米銀摩爾量之比為
    (100-1000):1;
    所述的熒光分子鏈,其核苷酸序列為:5’AAAAA?AAAAA?AAAAA?AAAAA?AAAA,
    其5’端由巰基修飾,3’端由Cy5修飾;
    所述的適配體鏈,其核苷酸序列為:5’AAAAA?AAAAA?AAAAA?GGGGC?ACGTT?
    TATCC?GTCCC?TCCTA?GTGGC?GTGCC?CC3’,其5’端由巰基修飾;
    (3)向步驟(2)得到的混合體系中加入1×PBS緩沖溶液,使得混合體系中的PBS緩
    沖溶液的濃度為0.1×PBS,靜置3~10小時(shí);
    (4)向步驟(3)得到的混合體系中加入1~5mol/L氯化鈉溶液,靜置2~4小時(shí),重復(fù)
    加入氯化鈉溶液與靜置的步驟1~4次,使得氯化鈉的終濃度為0.1~0.3mol/L;
    (5)將步驟(4)得到的混合體系靜置24~72小時(shí),取上清液;
    (6)將步驟(5)得到的上清液經(jīng)離心去除上清,取沉淀加入1×PBS緩沖溶液重懸,重
    復(fù)離心與重懸的步驟2~4次,1×PBS緩沖溶液每次的加入體積為待加入的混合體系體積
    的0.1~5倍;最后離心得到的沉淀用1×PBSM緩沖溶液重懸即得備用探針。
    3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的熒光分子修飾的納米銀探針的制備方法,其特征在于,
    步驟(6)中,所述的離心條件為10000~20000rpm條件下離心10~30分鐘。
    4.權(quán)利要求1所述的熒光分子修飾的納米銀探針在制備檢測(cè)人IgE的試劑中的應(yīng)
    用。
    5.一種用于檢測(cè)人IgE的試劑盒,其特征在于,該試劑盒包含如下試劑:熒光分
    子修飾的納米銀探針、磷酸鹽緩沖液、Tween-20、羊抗人IgE、人IgE、硝酸銀、氫醌、
    牛血清白蛋白、醛基片基。
    展開(kāi)

專利技術(shù)附圖

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