本發(fā)明公開(kāi)了一種熒光分子修飾的納米銀探針。納米銀探針以直徑為10~30nm的納米銀球?yàn)閮?nèi)核，銀球外表面鍵合有熒光分子鏈和適配體鏈。本發(fā)明還公開(kāi)了包含上述探針的試劑盒與在檢測(cè)人IgE中的應(yīng)用。本發(fā)明的納米銀探針耦合熒光增強(qiáng)液的方法能大大提高熒光檢測(cè)的靈敏度，檢測(cè)人IgE的線性范圍寬從0.5ng/ml至10μg/ml,檢測(cè)限低，特異性好。此種納米銀探針的合成及修飾方法成熟，熒光增強(qiáng)液廉價(jià)易得，兩者的聯(lián)合可以使檢測(cè)人IgE的靈敏度大大提高。此種信號(hào)放大的方法為蛋白質(zhì)標(biāo)志物的熒光分析檢測(cè)提供了一種極好的方法。

1.一種熒光分子修飾的納米銀探針，其特征在于，它以直徑為10～30nm的納米銀
球?yàn)閮?nèi)核，銀球外表面鍵合有熒光分子鏈和適配體鏈；
其中，所述的熒光分子鏈為5’-SH-AAAAA?AAAAA?AAAAA?AAAAA?AAAA-Cy5；
其中，所述的適配體鏈為：5’-SH-AAAAA?AAAAA?AAAAA?GGGGC?ACGTT?TATCC?
GTCCC?TCCTA?GTGGC?GTGCC?CC。
2.權(quán)利要求1所述的熒光分子修飾的納米銀探針的制備方法，其特征在于，它包
括如下步驟：
(1)在冰浴條件下，將2-20mmol/L硝酸銀溶液逐滴加入至3-30mmol/L硼氫化鈉溶
液中，硝酸銀與硼氫化鈉的反應(yīng)摩爾比為1：3，不斷攪拌至反應(yīng)完全，然后補(bǔ)加硼氫化
鈉溶液，補(bǔ)加的硼氫化鈉的摩爾量為上述參與反應(yīng)的硼氫化鈉的摩爾量的7%，繼續(xù)攪
拌至室溫，得到納米銀溶液；
(2)將熒光分子鏈和適配體鏈按摩爾比(1～99):(1～9)加入步驟(1)得到的納米銀溶液
中，靜置10～24小時(shí)，熒光分子鏈和適配體鏈的總摩爾量與納米銀摩爾量之比為
(100-1000):1；
所述的熒光分子鏈，其核苷酸序列為：5’AAAAA?AAAAA?AAAAA?AAAAA?AAAA，
其5’端由巰基修飾，3’端由Cy5修飾；
所述的適配體鏈，其核苷酸序列為：5’AAAAA?AAAAA?AAAAA?GGGGC?ACGTT?
TATCC?GTCCC?TCCTA?GTGGC?GTGCC?CC3’，其5’端由巰基修飾；
(3)向步驟(2)得到的混合體系中加入1×PBS緩沖溶液，使得混合體系中的PBS緩
沖溶液的濃度為0.1×PBS，靜置3～10小時(shí)；
(4)向步驟(3)得到的混合體系中加入1～5mol/L氯化鈉溶液，靜置2～4小時(shí)，重復(fù)
加入氯化鈉溶液與靜置的步驟1～4次，使得氯化鈉的終濃度為0.1～0.3mol/L；
(5)將步驟(4)得到的混合體系靜置24～72小時(shí)，取上清液；
(6)將步驟(5)得到的上清液經(jīng)離心去除上清，取沉淀加入1×PBS緩沖溶液重懸，重
復(fù)離心與重懸的步驟2～4次，1×PBS緩沖溶液每次的加入體積為待加入的混合體系體積
的0.1～5倍；最后離心得到的沉淀用1×PBSM緩沖溶液重懸即得備用探針。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的熒光分子修飾的納米銀探針的制備方法，其特征在于，
步驟(6)中，所述的離心條件為10000～20000rpm條件下離心10～30分鐘。
4.權(quán)利要求1所述的熒光分子修飾的納米銀探針在制備檢測(cè)人IgE的試劑中的應(yīng)
用。
5.一種用于檢測(cè)人IgE的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含如下試劑：熒光分
子修飾的納米銀探針、磷酸鹽緩沖液、Tween-20、羊抗人IgE、人IgE、硝酸銀、氫醌、
牛血清白蛋白、醛基片基。