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利用重組大腸桿菌高效生產丙酮酸氧化酶的培養基

  • 專利類型:發明專利
  • 有效期:不限
  • 發布日期:2022-01-26
  • 技術成熟度:通過中試
交易價格: ¥面議
  • 法律狀態核實
  • 簽署交易協議
  • 代辦官方過戶
  • 交易成功

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  • 技術(專利)類型 發明專利
  • 申請號/專利號 CN200710047750.4 
  • 技術(專利)名稱 利用重組大腸桿菌高效生產丙酮酸氧化酶的培養基 
  • 項目單位 華東理工大學
  • 發明人 張嗣良,趙劼,王永紅,儲炬,莊英萍,袁中一 
  • 行業類別 醫療器械-監護設備
  • 技術成熟度 通過中試
  • 交易價格 ¥面議
  • 聯系人 朱金玲
  • 發布時間 2022-01-26  
  • 01

    項目簡介

    本發明屬于生物工程領域,提供一種培養基,所述的培養基主要以甘油為碳源。本發明還提供了一種利用所述培養基生產丙酮酸氧化酶的方法。本發明首次揭示在生產丙酮酸氧化酶時利用甘油作為碳源,能夠使得重組大腸桿菌在發酵全過程持續表達丙酮酸氧化酶,極大地提高了丙酮酸氧化酶的產量;并且,采用本發明的培養基進行發酵,在整個發酵過程中pH值穩定,發酵工藝大大簡化。
    展開
  • 02

    說明書

    1.一種用于培養大腸桿菌的培養基,所述的培養基含有碳源、氮源、磷源、無機鹽;所述的大腸桿菌中含有表達載體,所述的表達載體中含有丙酮酸氧化酶的表達盒;其特征在于,所述的培養基中碳源按照重量計算90%以上是甘油;其中,甘油????????????????6-18ml/L;蛋白胨??????????????12-20g/L;酵母提取物??????????10-16g/L;硫酸銨??????????????3-7g/L;硫酸鎂??????????????1-4g/L;磷酸鹽??????????????4-8g/L;氯化鈉??????????????6-15g/L。2.如權利要求1所述的培養基,其特征在于,所述的培養基的碳源是甘油。3.如權利要求2所述的培養基,其特征在于,所述的培養基含有:甘油????????????????8-16ml/L;蛋白胨??????????????12-16g/L;酵母提取物??????????10-12g/L;硫酸銨??????????????4-6g/L;硫酸鎂??????????????2-3g/L;磷酸鹽??????????????5-7g/L;氯化鈉??????????????8-12g/L。4.如權利要求3所述的培養基,其特征在于,所述的磷酸鹽是復合磷酸鹽,其中,按照重量計算K2HPO4∶Na2HPO4∶KH2PO4=1∶2∶1。5.如權利要求3所述的培養基,其特征在于,所述的培養基中還含有微量元素1-2.2ml/L;其中所述的微量元素含有:FeSO4·7H2O????12.8±3g/L;ZnSO4·7H2O????2.84±1g/L;CuSO4·5H2O????1.6±0.5g/L;MnSO4·H2O?????3.2±1g/L;CaCl2??????????0.28±0.08g/L;CoCl2·6H2O????1.6±0.5g/L;H3BO4??????????0.24±0.08g/L;Na2MoO4????????12.8±3g/L;和KI?????????????0.16±0.05g/L。6.如權利要求1所述的培養基,其特征在于,所述的大腸桿菌是E.coliDH5α/pSMLPyOD,其制備方法如下:以Aerococcus?viridans?ATCC?10400基因組為模板,采用SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2引物對,PCR擴增得到AvPyOD基因,鑒定PCR擴增產物,經鑒定獲得序列正確的AvPyOD擴增產物;純化該PCR擴增產物;用限制性內切酶NcoI和BamHI酶切上述PCR擴增產物,將酶切后的產物連接入經過NcoI和BglII酶切的質粒pSML104中,獲得重組表達質粒pSMLPyOD;將重組質粒pSMLPyOD轉化E.coli?DH5α感受態細胞。7.權利要求1所述的培養基的用途,其特征在于,用于培養大腸桿菌,發酵生產丙酮酸氧化酶;其中,所述的大腸桿菌中含有表達載體,所述的表達載體中含有丙酮酸氧化酶的表達盒。8.一種生產丙酮酸氧化酶的方法,其特征在于,所述方法包括步驟:(1)利用權利要求1所述的培養基培養大腸桿菌,獲得培養產物;其中,所述的大腸桿菌中含有表達載體,所述的表達載體中含有丙酮酸氧化酶的表達盒;(2)從步驟(1)獲得的培養產物中分離獲得丙酮酸氧化酶。9.如權利要求8所述的方法,其特征在于,在步驟(1)中,培養時間是12-20小時;或者培養的溫度是28-37℃。10.如權利要求8所述的方法,其特征在于,所述的大腸桿菌是E.coliDH5α/pSMLPyOD,其制備方法如下:以Aerococcus?viridans?ATCC?10400基因組為模板,采用SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2引物對,PCR擴增得到AvPyOD基因,鑒定PCR擴增產物,經鑒定獲得序列正確的AvPyOD擴增產物;純化該PCR擴增產物;用限制性內切酶NcoI和BamHI酶切上述PCR擴增產物,將酶切后的產物連接入經過NcoI和BglII酶切的質粒pSML104中,獲得重組表達質粒pSMLPyOD;將重組質粒pSMLPyOD轉化E.coli?DH5α感受態細胞。
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專利技術附圖

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