本發(fā)明公開了一種制備紫背天葵胚性細胞懸浮培養(yǎng)細胞系的方法及其專用培養(yǎng)基。本發(fā)明的液體培養(yǎng)基是在MS基本培養(yǎng)液中添加2，4-D、KT和碳源得到的液體培養(yǎng)基；液體培養(yǎng)基中2，4-D的終濃度是1-3mg/L，KT的終濃度是0.2-1mg/L。本發(fā)明的制備紫背天葵胚性細胞懸浮培養(yǎng)細胞系的方法，是將紫背天葵胚性愈傷組織置于本發(fā)明的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到的懸浮培養(yǎng)細胞系。本發(fā)明中愈傷組織的誘導(dǎo)率可達到100％。本發(fā)明可有效地制備紫背天葵胚性細胞懸浮培養(yǎng)細胞系，為建立以紫背天葵為原料生物反應(yīng)器提供了可靠基礎(chǔ)。

1.一種用于紫背天葵懸浮培養(yǎng)細胞系的液體培養(yǎng)基，是在MS基本培養(yǎng)液中添加
2，4-D、KT和碳源得到的液體培養(yǎng)基；所述液體培養(yǎng)基中2，4-D的終濃度是1.5-2.5
mg/L，KT的終濃度是0.4-0.6mg/L；所述MS基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)是：1650
mg·L^-1?NH₄NO₃，1900mg·L^-1?KNO₃，170mg·L^-1?KH₂PO₄，370mg·L^-1?MgSO₄.7H₂O，
330mg·L^-1?CaCl₂，22.3mg·L^-1?MnSO₄.4H₂O，8.6mg·L^-1?ZnSO₄.7H₂O，6.2mg·L^-1
H₃BO₃，0.83mg·L^-1?KI，0.25mg·L^-1?Na₂MoO₄.2H₂O，0.025mg·L^-1?CuSO₄.5H₂O，0.025
mg·L^-1?CoCl₂.6H₂O，27.8mg·L^-1?FeSO₄.4H₂O，37.3mg·L^-1?Na₂EDTA，2.0mg·L^-1甘
氨酸，0.4mg·L^-1鹽酸硫胺素，0.5mg·L^-1鹽酸吡哆素，0.5mg·L^-1煙酸，100mg·L^-1
肌醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體培養(yǎng)基，其特征在于：所述液體培養(yǎng)基中2，4-D的
終濃度是2mg/L，KT的終濃度是0.5mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的液體培養(yǎng)基，其特征在于：所述碳源為葡萄糖、
麥芽糖或蔗糖，所述蔗糖的終濃度是25-35g/L。
4.一種制備紫背天葵胚性細胞懸浮培養(yǎng)細胞系的方法，是將紫背天葵胚性愈傷
組織置于權(quán)利要求1-3中任一所述的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到懸浮培養(yǎng)細胞系。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述紫背天葵胚性愈傷組織是將
紫背天葵葉片置于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于：所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在MS
基本培養(yǎng)液中添加2，4-D、KT、碳源和凝膠劑得到的固體培養(yǎng)基；其中2，4-D的終濃
度是1-3mg/L，KT的終濃度是0.2-1mg/L；
所述MS基本培養(yǎng)液的溶劑是水、溶質(zhì)是：1650mg·L^-1?NH₄NO₃，1900mg·L^-1?KNO₃，
170mg·L^-1?KH₂PO₄，370mg·L^-1?MgSO₄.7H₂O，330mg·L^-1?CaCl₂，22.3mg·L^-1
MnSO₄.4H₂O，8.6mg·L^-1?ZnSO₄.7H₂O，6.2mg·L^-1?H₃BO₃，0.83mg·L^-1?KI，0.25mg·L^-1
Na₂MoO₄.2H₂O，0.025mg·L^-1?CuSO₄.5H₂O，0.025mg·L^-1?CoCl₂.6H₂O，27.8mg·L^-1
FeSO₄.4H₂O，37.3mg·L^-1?Na₂EDTA，2.0mg·L^-1甘氨酸，0.4mg·L^-1鹽酸硫胺素，0.5
mg·L^-1鹽酸吡哆素，0.5mg·L^-1煙酸，100mg·L^-1肌醇。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中2，4-D
的終濃度是2mg/L，KT的終濃度是0.5mg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述凝膠劑是瓊脂、卡拉膠
或Gelrite，所述瓊脂的終濃度是7-9g/L；
所述碳源為葡萄糖、麥芽糖或蔗糖，所述蔗糖的終濃度是20-40g/L。
9.如權(quán)利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于：所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的條件是：
溫度為26℃，光照強度為2500lux，光照時間為16小時/天。