本發明屬于細胞培養技術領域，具體涉及一種高效分離和培養人原代黑色素細胞的方法。本發明將ROCK抑制劑添加到成分為Ham’sF?12培養基，二丁酰環腺苷酸，3?異丁基?1?甲基黃嘌呤，正釩酸鈉，佛波醇12?十四酸酯13?乙酸酯，胎牛血清和雙抗的培養基中，各成分相互作用，使黑色素細胞呈克隆生長，將培養周期縮短一半，大大提高了黑色素細胞的分離效率；本發明分離和培養方法簡單，易于操作，且培養基成分少，可以實現人源代黑色素細胞的規模化生產。

1.一種高效分離和培養人原代黑色素細胞的方法，其特征在于，向培養人原代黑色素細胞的培養基中添加ROCK抑制劑；所述ROCK抑制劑為Y-27632，濃度為1-20μM；所述培養基包含以下組分：Ham’sF-12培養基60％-80％，二丁酰環腺苷酸1-5×10^-4M，3-異丁基-1-甲基黃嘌呤0.2-2×10^-4M，正釩酸鈉0.5-5μM，佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯10-100ng/ml，胎牛血清2-10％和雙抗0.05-0.1％。2.根據權利要求1所述高效分離和培養人原代黑色素細胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：(1)將新鮮的皮膚組織去掉皮膚的皮下組織，切成小塊后放入含有分散酶溶液的培養皿中4℃過夜培養；(2)將表皮從步驟(1)培養后的皮膚組織上剝離下來，進行黑色素細胞分離；(3)將步驟(2)分離得到的黑色素細胞接種于含ROCK抑制劑的培養基中培養，培養48小時后，更換不含ROCK抑制劑的培養基，繼續培養，每三天換液一次。3.根據權利要求2所述高效分離和培養人原代黑色素細胞的方法，其特征在于，步驟(1)中分散酶溶液濃度為2.5mg/ml。4.根據權利要求2所述高效分離和培養人原代黑色素細胞的方法，其特征在于，步驟(2)中黑色素細胞分離的具體步驟為：將剝離下的表皮用手術刀切成勻漿樣，再用10ml胰酶37℃消化15-30分鐘；加入10ml含10％血清的DMEM培養基反復吹打20次以上獲得單細胞懸液，用100微米的濾網過濾后1000轉離心5分鐘，棄掉上層培養液，然后重復進行一次，分離得到黑色素細胞。5.根據權利要求4所述高效分離和培養人原代黑色素細胞的方法，其特征在于，所用胰酶為0.05％的胰酶。