本發明公開了一種高效發酵綠色木霉制備纖維素酶的方法。采用方法的要點是將綠色木霉接種于察氏培養基上活化，挑取單菌落接種于液體活化培養基中擴大培養得到種子液，按照體積比1:10～20的接種量接種于液體產酶培養基中，40至60目毛竹粉5～20g/L作為發酵底物，液體發酵72～120h制備纖維素酶。該方法穩定、高效，特別適用于綠色木霉發酵產纖維素酶。本發明針對綠色木霉生理特性優化得到一套高效液體發酵工藝，可以獲得高酶活力的纖維素酶；同時提出資源化利用毛竹原料作為纖維素酶誘導底物，制備高附加值生物酶制劑，是高值化利用毛竹資源的一條創新思路，可切實提高我國竹區農民的經濟收入，具有重要的現實意義。

1.一種高效發酵綠色木霉制備纖維素酶的方法，其特征在于，包括以下步
驟：
1)將未經活化的綠色木霉(Trichoderma?viviride)在無菌環境中以無菌水溶
解，采用平板劃線法將菌種接種于察氏培養基(czapck)上，在24～28℃的恒溫
培養箱中培養72～108h，至生長出單菌落，得到經過活化的綠色木霉；
2)將步驟1)得到的經過活化的綠色木霉在無菌環境中挑取單菌落，接種
于液體活化培養基中，在24～28℃、180～260r/min的恒溫振蕩器中培養60～72h，
得到擴大培養的種子液，所述液體活化培養基配方為：葡萄糖10～20g/L、蛋白
胨1～2g/L、Tween?80?0.2～0.4g/L、硫酸銨1～2g/L、磷酸二氫鉀1～3g/L、硫酸鎂
0.1～0.3g/L、氯化鈣0.1～0.3g/L、尿素0.4～0.8g/L、占液體活化培養基總體積
10～20％的Mandels營養鹽、溶劑為pH＝3或7磷酸緩沖液(PBS)，120℃高壓蒸
汽滅菌20min；
3)將步驟2)得到的擴大培養的種子液按照體積比1:15～20的接種量接種
于液體產酶培養基中，按照60％的裝入量裝入發酵罐中，產酶培養制備纖維素
酶，控制發酵液pH值3或7、發酵溫度24～28℃、通氣量1:0.4～1.2、發酵時間
96～120h，得到的發酵液在4000r/min的冷凍離心機中離心10min，采用截留分
子量100～500k的聚醚砜膜濃縮使其濃度提升20倍，得到纖維素酶，所述液體
產酶培養基配方為：葡萄糖4～6g/L、40至60目毛竹粉5～20g/L、Tween?80?0.2～0.6
g/L、硫酸銨1～3g/L、磷酸二氫鉀3～5g/L、硫酸鎂0.3～0.5g/L、氯化鈣0.3～0.5g/L、
尿素0.8～1.2g/L，占液體產酶培養基總體積0.1～0.3％的Mandels微量元素、溶劑
為pH＝3或7PBS，120℃高壓蒸汽滅菌20min。