本發(fā)明大體上與植物生物技術(shù)相關(guān)。更具體來說，本發(fā)明涉及用于麻風(fēng)樹屬植物，如麻風(fēng)樹的高效的直接器官發(fā)生和間接器官發(fā)生的方法和培養(yǎng)基組成。

1.通過器官發(fā)生再生麻風(fēng)樹(Jatropha curcas)的方法，包括以下步驟：
(a)將麻風(fēng)樹外植體在固體枝芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，誘導(dǎo)枝芽形成，其中所述麻風(fēng)樹外
植體是葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的薄切片或來自所述葉柄、花梗、花序梗、或花序軸的薄
切片的愈傷組織，其中所述薄切片厚度為0.5mm-1.0mm，其中所述枝芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含MS基
礎(chǔ)鹽、B5維生素、吲哚-3-丁酸(IBA)、噻苯隆(TDZ)、6-芐基氨基嘌呤(BA)、硫代硫酸銀(STS)
和酪蛋白水解物，其中IBA的量為0.05μM-4.90μM，TDZ的量為0.05μM-2.27μM，BA的量為0.02
μM-4.44μM，STS的量為0.10μM-20μM，酪蛋白水解物的量為5mg/l-200mg/l；
(b)將枝芽在固體枝芽增殖和發(fā)育培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以使枝芽增殖和發(fā)育，其中所述枝芽
增殖和發(fā)育培養(yǎng)基包含MS基礎(chǔ)鹽、B5維生素、IBA、TDZ、BA、玉米素(Zn)、硫酸腺嘌呤(AdSO₄)
和酪蛋白水解物，其中IBA的量為0.05μM-4.90μM，TDZ的量為0.01μM-2.27μM，BA的量為0.04
μM-4.44μM，Zn的量為0.05μM-4.56μM，AdSO₄的量為5.43μM-271.5μM，酪蛋白水解物的量為
5mg/l-200mg/l；
(c)將從發(fā)育的枝芽衍生而來的枝芽叢在固體芽伸長培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以使芽伸長，其中
所述芽伸長培養(yǎng)基包含MS基礎(chǔ)鹽、B5維生素、BA、激動(dòng)素(Kn)、赤霉酸(GA₃)、硫酸腺嘌呤
(AdSO₄)和酪蛋白水解物，其中BA的量為0.04μM-4.44μM，Kn的量為0.05μM-4.65μM，GA₃的量
為0.03μM-2.89μM，AdSO₄的量為5.43μM-271.5μM，酪蛋白水解物的量為5mg/l-200mg/l；
(d)將從所述枝芽叢分離出的伸長的芽在固體芽成熟培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以使芽成熟，其中
所述芽成熟培養(yǎng)基包含MS基礎(chǔ)鹽、B5維生素、IBA、Kn、GA₃、硫酸腺嘌呤(AdSO₄)和酪蛋白水解
物，其中IBA的量為0.05μM-4.90μM，Kn的量為0.05μM-4.65μM，GA₃的量為0.03μM-2.89μM，
AdSO₄的量為5.43μM-271.5μM，酪蛋白水解物的量為5mg/l-200mg/l；和
(e)將成熟的芽在液體生長調(diào)節(jié)劑溶液中浸漬，將浸漬過的芽轉(zhuǎn)移到土里，以使麻風(fēng)樹
植物生長，其中所述液體生長調(diào)節(jié)劑溶液包含MS基礎(chǔ)鹽、B5維生素和IBA，其中IBA的量為
4.90μM-245.0μM。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其在步驟(a)之前進(jìn)一步包括以下步驟：
將所述薄切片在固體愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以誘導(dǎo)器官發(fā)生性愈傷組織，其中
所述固體愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含MS基礎(chǔ)鹽、B5維生素、IBA、2,4-二氯苯氧基乙酸(2,4-
D)、TDZ、BA和脯氨酸，其中IBA的量為0.05μM-4.90μM，2,4-D的量為0.05μM-4.53μM，TDZ的量
為0.05μM-2.27μM，BA的量為0.04μM-4.44μM，脯氨酸的量為10mg/l-500mg/l。
3.權(quán)利要求2所述的方法，其中所述固體愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含：
IBA，含量為0.49μM；
2,4-D，含量為0.45μM；
TDZ，含量為0.45μM；
BA，含量為0.66μM；和
脯氨酸，含量為100mg/l。
4.權(quán)利要求1所述的方法，其中培養(yǎng)基包含：
枝芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含：
IBA，含量為0.98μM；
TDZ，含量為0.45μM；
BA，含量為0.22μM；
STS，含量為4.0μM；和
酪蛋白水解物，含量為100mg/l；
枝芽增殖和發(fā)育培養(yǎng)基包含：
IBA，含量為0.49μM；
TDZ，含量為0.23μM；
BA，含量為0.44μM；
Zn，含量為0.92μM；
AdSO₄，含量為135.75μM；和
酪蛋白水解物，含量為100mg/l；
枝芽伸長培養(yǎng)基包含：
BA，含量為0.66μM；
Kn，含量為1.17μM；
GA₃，含量為0.73μM；
AdSO₄，含量為135.75μM；和
酪蛋白水解物，含量為100mg/l；
芽成熟培養(yǎng)基包含：
IBA，含量為0.49μM；
Kn，含量為1.17μM；
GA₃，含量為0.73μM；
AdSO₄，含量為135.75μM；和
酪蛋白水解物的含量為100mg/l；以及液體生長調(diào)節(jié)劑溶液包含：
IBA，含量為49.0μM。
5.權(quán)利要求2所述的方法，其中培養(yǎng)基包含：
枝芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含：
IBA，含量為0.98μM；
TDZ，含量為0.45μM；
BA，含量為0.22μM；
STS，含量為4.0μM；和
酪蛋白水解物，含量為100mg/l；
枝芽增殖和發(fā)育培養(yǎng)基包含：
IBA，含量為0.49μM；
TDZ，含量為0.23μM；
BA，含量為0.44μM；
Zn，含量為0.92μM；
AdSO₄，含量為135.75μM；和
酪蛋白水解物，含量為100mg/l；
枝芽伸長培養(yǎng)基包含：
BA，含量為0.66μM；
Kn，含量為1.17μM；
GA₃，含量為0.73μM；
AdSO₄，含量為135.75μM；和
酪蛋白水解物，含量為100mg/l；
芽成熟培養(yǎng)基包含：
IBA，含量為0.49μM；
Kn，含量為1.17μM；
GA₃，含量為0.73μM；
AdSO₄，含量為135.75μM；和
酪蛋白水解物的含量為100mg/l；以及液體生長調(diào)節(jié)劑溶液包含：
IBA，含量為49.0μM。
6.權(quán)利要求3所述的方法，其中培養(yǎng)基包含：
枝芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基包含：
IBA，含量為0.98μM；
TDZ，含量為0.45μM；
BA，含量為0.22μM；
STS，含量為4.0μM；和
酪蛋白水解物，含量為100mg/l；
枝芽增殖和發(fā)育培養(yǎng)基包含：
IBA，含量為0.49μM；
TDZ，含量為0.23μM；
BA，含量為0.44μM；
Zn，含量為0.92μM；
AdSO₄，含量為135.75μM；和
酪蛋白水解物，含量為100mg/l；
枝芽伸長培養(yǎng)基包含：
BA，含量為0.66μM；
Kn，含量為1.17μM；
GA₃，含量為0.73μM；
AdSO₄，含量為135.75μM；和
酪蛋白水解物，含量為100mg/l；
芽成熟培養(yǎng)基包含：
IBA，含量為0.49μM；
Kn，含量為1.17μM；
GA₃，含量為0.73μM；
AdSO₄，含量為135.75μM；和
酪蛋白水解物的含量為100mg/l；以及
液體生長調(diào)節(jié)劑溶液包含：
IBA，含量為49.0μM。
7.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的方法，其中每種培養(yǎng)基進(jìn)一步包含0.5％-10％的蔗糖
和0.5％-1.0％的瓊脂。
8.權(quán)利要求7所述的方法，其中每種培養(yǎng)基包含3％的蔗糖和0.8％的瓊脂。
9.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的方法，其中每個(gè)培養(yǎng)步驟在25±2℃進(jìn)行。
10.權(quán)利要求7所述的方法，其中每個(gè)培養(yǎng)步驟在25±2℃進(jìn)行。
11.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的方法，其中每個(gè)培養(yǎng)步驟在光周期為16小時(shí)光照/8
小時(shí)黑暗，光強(qiáng)150μEm^-2s^-1進(jìn)行。
12.權(quán)利要求7所述的方法，其中每個(gè)培養(yǎng)步驟在光周期為16小時(shí)光照/8小時(shí)黑暗，光
強(qiáng)150μEm^-2s^-1進(jìn)行。
13.權(quán)利要求9所述的方法，其中每個(gè)培養(yǎng)步驟在光周期為16小時(shí)光照/8小時(shí)黑暗，光
強(qiáng)150μEm^-2s^-1進(jìn)行。
14.權(quán)利要求10所述的方法，其中每個(gè)培養(yǎng)步驟在光周期為16小時(shí)光照/8小時(shí)黑暗，光
強(qiáng)150μEm^-2s^-1進(jìn)行。
15.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
2-4周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序梗或花序軸的薄切片時(shí)，2-5周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植
體為來自所述葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的愈傷組織時(shí)，4-8周，用于枝芽誘導(dǎo)；
2-4周，用于芽增殖和發(fā)育；
2-4周，用于芽伸長；和
2-6周，用于芽成熟。
16.權(quán)利要求15所述的方法，其中培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
3周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的薄切片時(shí)，4周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植體
為來自所述葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的愈傷組織時(shí)，7周，用于枝芽誘導(dǎo)；
3周，用于芽增殖和發(fā)育；
3周，用于芽伸長；和
3周，用于芽成熟。
17.權(quán)利要求7所述的方法，其中所述培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
2-4周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序梗或花序軸的薄切片時(shí)，2-5周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植
體為來自所述葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的愈傷組織時(shí)，4-8周，用于枝芽誘導(dǎo)；
2-4周，用于芽增殖和發(fā)育；
2-4周，用于芽伸長；和
2-6周，用于芽成熟。
18.權(quán)利要求17所述的方法，其中培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
3周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的薄切片時(shí)，4周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植體
為來自所述葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的愈傷組織時(shí)，7周，用于枝芽誘導(dǎo)；
3周，用于芽增殖和發(fā)育；
3周，用于芽伸長；和
3周，用于芽成熟。
19.權(quán)利要求9所述的方法，其中所述培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
2-4周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序梗或花序軸的薄切片時(shí)，2-5周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植
體為來自所述葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的愈傷組織時(shí)，4-8周，用于枝芽誘導(dǎo)；
2-4周，用于芽增殖和發(fā)育；
2-4周，用于芽伸長；和
2-6周，用于芽成熟。
20.權(quán)利要求19所述的方法，其中培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
3周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的薄切片時(shí)，4周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植體
為來自所述葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的愈傷組織時(shí)，7周，用于枝芽誘導(dǎo)；
3周，用于芽增殖和發(fā)育；
3周，用于芽伸長；和
3周，用于芽成熟。
21.權(quán)利要求10所述的方法，其中所述培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
2-4周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的薄切片時(shí)，2-5周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植
體為來自所述葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的愈傷組織時(shí)，4-8周，用于枝芽誘導(dǎo)；
2-4周，用于芽增殖和發(fā)育；
2-4周，用于芽伸長；和
2-6周，用于芽成熟。
22.權(quán)利要求21所述的方法，其中培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
3周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的薄切片時(shí)，4周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植體
為來自所述葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的愈傷組織時(shí)，7周，用于枝芽誘導(dǎo)；
3周，用于芽增殖和發(fā)育；
3周，用于芽伸長；和
3周，用于芽成熟。
23.權(quán)利要求11所述的方法，其中所述培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
2-4周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的薄切片時(shí)，2-5周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植
體為來自所述葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的愈傷組織時(shí)，4-8周，用于枝芽誘導(dǎo)；
2-4周，用于芽增殖和發(fā)育；
2-4周，用于芽伸長；和
2-6周，用于芽成熟。
24.權(quán)利要求23所述的方法，其中培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
3周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的薄切片時(shí)，4周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植體
為來自所述葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的愈傷組織時(shí)，7周，用于枝芽誘導(dǎo)；
3周，用于芽增殖和發(fā)育；
3周，用于芽伸長；和
3周，用于芽成熟。
25.權(quán)利要求12所述的方法，其中所述培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
2-4周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序梗或花序軸的薄切片時(shí)，2-5周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植
體為來自所述葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的愈傷組織時(shí)，4-8周，用于枝芽誘導(dǎo)；
2-4周，用于芽增殖和發(fā)育；
2-4周，用于芽伸長；和
2-6周，用于芽成熟。
26.權(quán)利要求25所述的方法，其中培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
3周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序梗或花序軸的薄切片時(shí)，4周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植體
為來自所述葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的愈傷組織時(shí)，7周，用于枝芽誘導(dǎo)；
3周，用于芽增殖和發(fā)育；
3周，用于芽伸長；和
3周，用于芽成熟。
27.權(quán)利要求13所述的方法，其中所述培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
2-4周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的薄切片時(shí)，2-5周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植
體為來自所述葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的愈傷組織時(shí)，4-8周，用于枝芽誘導(dǎo)；
2-4周，用于芽增殖和發(fā)育；
2-4周，用于芽伸長；和
2-6周，用于芽成熟。
28.權(quán)利要求27所述的方法，其中培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
3周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的薄切片時(shí)，4周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植體
為來自所述葉柄、花梗、花序梗或花序軸的愈傷組織時(shí)，7周，用于枝芽誘導(dǎo)；
3周，用于芽增殖和發(fā)育；
3周，用于芽伸長；和
3周，用于芽成熟。
29.權(quán)利要求14所述的方法，其中所述培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
2-4周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的薄切片時(shí)，2-5周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植
體為來自所述葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的愈傷組織時(shí)，4-8周，用于枝芽誘導(dǎo)；
2-4周，用于芽增殖和發(fā)育；
2-4周，用于芽伸長；和
2-6周，用于芽成熟。
30.權(quán)利要求29所述的方法，其中培養(yǎng)進(jìn)行的時(shí)間如下：
3周，用于愈傷組織誘導(dǎo)；
當(dāng)外植體為葉柄、花梗、花序?；蚧ㄐ蜉S的薄切片時(shí)，4周，用于枝芽誘導(dǎo)，或當(dāng)外植體
為來自所述葉柄、花梗、花序梗或花序軸的愈傷組織時(shí)，7周，用于枝芽誘導(dǎo)；
3周，用于芽增殖和發(fā)育；
3周，用于芽伸長；和
3周，用于芽成熟。