本發(fā)明公開(kāi)了一種豬源鏈球菌的高密度培養(yǎng)方法，其步驟：（1）制備平板種子：將凍干保存的豬源鏈球菌野生種在TSA平皿上劃線(xiàn)，培養(yǎng)，待長(zhǎng)出單菌落后，再接種TSA平板，保存；（2）制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)取一環(huán)的一級(jí)種子的單菌落，接種于TSB液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)，得到一級(jí)種子液；（3）制備二級(jí)種子液：取一級(jí)種子液接種量接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，得到豬鏈球菌二級(jí)種子液；（4）上罐發(fā)酵：A、發(fā)酵液配制：B、接種及補(bǔ)料：C、發(fā)酵控制：D、發(fā)酵終點(diǎn)判斷：當(dāng)DO值重新由較低值回升到80%，放罐收菌。原料來(lái)源廣泛、低廉，發(fā)酵快、產(chǎn)量高，提高豬鏈球菌菌體抗原的發(fā)酵水平，帶來(lái)優(yōu)質(zhì)、價(jià)廉的豬鏈球菌疫苗產(chǎn)品。

1.一種豬源鏈球菌的高密度培養(yǎng)方法，其步驟是：（1）制備平板種子：將凍干保存的豬源鏈球菌TSA平皿上劃線(xiàn)，置37℃培養(yǎng)16～24小時(shí)，待長(zhǎng)出單菌落后，再接種TSA平板，置37℃培養(yǎng)14～16小時(shí)，2～8℃保存；（2）制備一級(jí)種子液：用接種環(huán)取一環(huán)步驟（1）的平板種子的單菌落，接種于TSB液體培養(yǎng)基中，置37℃搖床170rpm，培養(yǎng)5-7小時(shí)，OD₆₀₀達(dá)到0.4～0.6，得到一級(jí)種子液；（3）制備二級(jí)種子液：取步驟（2）的一級(jí)種子液以V/V計(jì)為1.5%的接種量接入裝有200mL發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL搖瓶中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，控制搖床溫度為37℃，轉(zhuǎn)速為170rpm，起始pH為6.8-7.5，發(fā)酵周期為4-6小時(shí)，得到豬鏈球菌二級(jí)種子液；所述的發(fā)酵培養(yǎng)基配方：酵母粉25g/L、胰蛋白胨25g/L、硫酸鎂0.3g/L、醋酸銨3g/L調(diào)pH值達(dá)到7.1-7.5，121℃滅菌20min，加入牛血清5%V/V，300g/L濃度葡萄糖1%、1M磷酸緩沖液5%V/V；（4）上罐發(fā)酵：A、發(fā)酵液配制：酵母粉25g/L、胰蛋白胨25g/L、硫酸鎂1.5g/L、醋酸銨3g/L，按50%~70%的裝液量配制，加入0.01%體積的泡敵，用NaOH調(diào)pH至7.2-7.6，121℃滅菌20min；B、接種及補(bǔ)料：按1%~3%V/V的接種量和5%~7%V/V的血清量將種子液和血清混合后，用補(bǔ)料泵打入發(fā)酵罐中，于接種后補(bǔ)600g/L濃度葡萄糖溶液，其流加手段為以下所述三種手段之一：對(duì)數(shù)期一次流加發(fā)酵液終濃度為0.7%m/V葡萄糖、對(duì)數(shù)期分次流加終濃度為0.25%m/V葡萄糖、對(duì)數(shù)期連續(xù)流加葡萄糖溶液，維持糖質(zhì)量濃度在0.05%~0.1%m/V；C、發(fā)酵控制：通過(guò)pH控制和DO控制維持菌體的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)，其pH控制手段為以下所述三種手段之一：初始磷酸緩沖液控pH值、在線(xiàn)流加NaOH溶液控pH值在6.7~7.3、在線(xiàn)流加氨水溶液控pH值在6.7~7.3；其DO控制手段：在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期通過(guò)加速攪拌和提高通氣量維持DO值在10%~30%；D、發(fā)酵終點(diǎn)判斷：當(dāng)DO值重新由較低值回升到80%，放罐收菌。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種豬源鏈球菌的高密度培養(yǎng)方法，其特征在于：所述的豬源鏈球菌為1型、2型、7型、9型或C群馬鏈球菌獸疫亞種中的任意一種。?