本發明涉及植物細胞培養技術，具體的說是一種利用三尖杉液體懸浮培養細胞生物合成松香烷二萜類化合物的方法。將三尖杉細胞置于其常用培養基中培養，細胞接種量為50～150g/L濕重，在細胞指數生長初期，于每升培養基中同時加入終濃度為10～2000μM的誘導劑和50～200g的吸附劑，所述誘導劑為非生物誘導劑或真菌誘導子。本發明為生物合成方法，方法穩定，環境友好；產物完全被吸附到吸附劑上，大大簡化了分離純化的操作流程，不僅降低了成本，而且易于實現工業化生產。同時，本發明合成了包括一個新的化合物在內的7個松香烷二萜類化合物。松香烷二萜類化合物具有良好的生物活性，是一類重要的先導化合物，該技術具有重要的商業應用前景。

1.利用三尖杉培養細胞生物合成松香烷二萜類化合物的方法，其特征
在于：將三尖杉細胞置于其常用培養基中培養，細胞接種量為50～150g/L
濕重，在細胞指數生長初期，于每升培養基中同時加入終濃度為10～
2000μM的誘導劑和50～200g的吸附劑，所述誘導劑為非生物誘導劑或真
菌誘導子；繼續培養7～14天后，分別收獲細胞和吸附劑；
第一次提取：室溫下，將真空抽濾后的吸附劑先用極性或中等極性有
機溶劑提取2～5次；合并提取液，過濾，旋轉蒸干；
第二次提取：在蒸干的粗提物中加入堿液以及等體積的非極性有機溶
劑萃取，粗提物與堿液質量體積比例1g∶3～15ml；
分離純化：萃取8～16小時后，將有機層分離出來，將有機層旋轉蒸
干，然后置于硅膠柱上分離，所用硅膠為200～300目硅膠，洗脫方式為梯
度洗脫，每個梯度所用洗脫液的體積為200-800ml，用樣品瓶連續收集洗脫
液，每個樣品瓶收集5-15ml洗脫液，同時利用薄層色譜對樣品瓶收集的洗
脫液進行檢測，當所用的洗脫液為環己烷-乙酸乙酯v/v為8∶1時，分別
得到化合物1和4的粗品；環己烷-乙酸乙酯v/v為5∶1時，分別得到化
合物3和6的粗品；環己烷-乙酸乙酯v/v為2∶1時，分別得到化合物2、
5和7的粗品；將這7個化合物的粗品分別置于凝膠柱上完成進一步的純化，
得到7個化合物的純品；這7個化合物分別為：
化合物1：3-羥基-2-異丙基-6-甲基-5-(4-甲基-3-氧戊基)萘
化合物2：松香-8，11，13-三烯-3β，12-二醇
化合物3：12-松香羥基-6，8，11，13-四烯-3-酮
化合物4：松香三烯基-3β-醇
化合物5：11，12-二羥基-8，11，13-松香三烯-3，7-二酮
化合物6：11-羥基-12-松香甲氧基-8，11，13-三烯-3，7-二酮
化合物7：3β，11-二羥基-12-松香甲氧基-8，11，13-三烯-7-酮
所述非生物誘導劑為硝酸銀、水楊酸、茉莉酸或茉莉酸甲酯；
所述吸附劑為對萜類化合物具有較強的吸附能力并對細胞無毒的大孔
吸附樹脂，大孔吸附樹脂為XAD-7HP，XAD-4，XAD-1600或HP2MG；
所述三尖杉培養細胞的常用培養基組成為，于MS基礎培養基中添加終
濃度為0.1～2.5mg/L2，4-二氯苯氧基乙酸，0.1～1mg/L激動素以及10～
50g/L蔗糖，pH值為5.4～6.2；
所述第二次提取時所用的堿液是指體積濃度為0。1～1％的氨水、質量濃
度為0.05～0.5％的氫氧化鈉或質量濃度為0.05～0.5％的氫氧化鉀。
2.按照權利要求1所述方法，其特征在于：
所述細胞指數生長初期是細胞接種于培養基后的第4～10天。
3.按照權利要求1所述方法，其特征在于：所述三尖杉細胞的培養條
件為：旋轉式搖床，轉速80～150rpm，培養溫度為20～30℃，暗培養；培
養周期為14～25天，每隔14～21天傳代一次。
4.按照權利要求1所述方法，其特征在于：所述第一次提取時所用的
極性或中等極性的有機溶劑為甲醇、乙醇、丙酮或乙酸乙酯；
每次提取過程中，吸附劑與有機溶劑質量體積比例1g∶3-15ml，每次
提取先采用振蕩提取30分鐘～3小時，然后超聲提取10～60分鐘。
5.按照權利要求1所述方法，其特征在于：
所述第二次提取時所用的非極性溶劑是指氯仿或二氯甲烷。
6.按照權利要求1所述方法，其特征在于：所述硅膠柱的洗脫液梯度
組成依次為環己烷、環己烷-乙酸乙酯v/v為60～10∶1、環己烷-乙酸乙酯
v/v為8∶1、環己烷-乙酸乙酯v/v為5∶1、環己烷-乙酸乙酯v/v為3∶1、
環己烷-乙酸乙酯v/v為2∶1、環己烷-乙酸乙酯v/v為1∶1、乙酸乙酯。
7.按照權利要求1所述方法，其特征在于：所述凝膠柱的填料為
Sephadex^TMLH-20；所用洗脫液為甲醇或體積比1∶1的甲醇-二氯甲烷。