本發(fā)明屬于檢測領(lǐng)域，具體涉及一種熒光生物探針、包含該熒光生物探針的生物檢測系統(tǒng)及其檢測Cu、Mg和Pb濃度的方法。本發(fā)明提供的熒光生物探針及含有該熒光生物探針的生物檢測系統(tǒng)可以同時檢測Cu、Mg和Pb三種金屬離子濃度，且靈敏度高、操作簡單快捷、成本低廉，能夠廣泛應(yīng)用于藥品、食品安全、臨床和環(huán)境檢測等領(lǐng)域。

1.一種熒光生物檢測系統(tǒng)，其包括由三種核酸片段S1、S2和S3組成的熒光生物探針和
氧化石墨烯，其中S1、S2和S3的5’端分別標(biāo)記不同的熒光基團，S1的堿基序列為5’-TTCTCT
CTrAGGACAAAACATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGAGT-3’，S2的堿基序列為5’-ACTCACTATr
AGGAAGAGATGGGTAAGCCTGGGCCTCTTTCTTTTTAAGAAAGAAC-3’，S3的堿基序列為5’-AGCTTCTTT
CTAATACGGCTTACCTTTTGTCAGCGATCCGGAACGGCACCCATGTGAGAGAA-3’；三種核酸片段S1、S2和
S3組成“Y”字形剛性雙鏈結(jié)構(gòu)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光生物檢測系統(tǒng)，其特征在于，所述的熒光基團選自FAM、
Cy5和ROX。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的熒光生物檢測系統(tǒng)，其特征在于，所述的熒光生物探針由濃度
均為50nmol/L的S1、S2和S3的Tris-HCl緩沖溶液配制而成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的熒光生物檢測系統(tǒng)，其特征在于，所述的氧化石墨烯采用
Tris-HCl緩沖溶液配制，其中，氧化石墨烯的濃度為60-100μg/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的熒光生物檢測系統(tǒng)，其特征在于，所述氧化石墨烯的濃度為
80-100μg/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的熒光生物檢測系統(tǒng)，其特征在于，所述氧化石墨烯的濃度為
100μg/mL。
7.一種使用權(quán)利要求1～6任一項所述熒光生物檢測系統(tǒng)檢測Cu²⁺、Mg²⁺或Pb²⁺三種金屬
離子濃度的生物檢測方法，包括如下步驟:
(1)室溫下，將待測品、熒光生物探針S1、S2和S3的Tris-HCl緩沖溶液混合均勻后，孵化
時間為T1，加入氧化石墨烯混合均勻后，孵化時間為T2；
(2)測定步驟(1)所得物的熒光發(fā)射光譜強度，根據(jù)熒光強度-Cu²⁺濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待
測樣品的Cu²⁺濃度值，根據(jù)熒光強度-Mg²⁺濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測樣品的Mg²⁺濃度值，根據(jù)熒
光強度-Pb²⁺濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測樣品的Pb²⁺濃度值。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的生物檢測方法，其特征在于，所述生物檢測方法包括如下步
驟:
(1)室溫下，將一系列濃度的Cu²⁺、Mg²⁺和Pb²⁺溶液標(biāo)準(zhǔn)品、熒光生物探針S1、S2和S3的
Tris-HCl緩沖溶液混合均勻，孵化時間為T1，加入氧化石墨烯混合均勻后，孵化時間為T2；
(2)測定步驟(1)所得物的熒光發(fā)射光譜強度，制備熒光強度-Cu²⁺濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線、熒光
強度-Mg²⁺濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線和熒光強度-Pb²⁺濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(3)室溫下，取待測樣品，重復(fù)步驟(1)；
(4)測定步驟(3)所得物的熒光發(fā)射光譜強度，根據(jù)熒光強度-Cu²⁺濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線、熒光
強度-Mg²⁺濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線和熒光強度-Pb²⁺濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測樣品的Cu²⁺濃度、Mg²⁺濃度
和Pb²⁺濃度。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的生物檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)中的孵化時間T1
為5-60min。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的生物檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)中的孵化時間T1為
5-20min。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的生物檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)中的孵化時間T1
為5-10min；步驟(1)中所述的Tris-HCl緩沖溶液的濃度為50mmol/L，pH7.5，含50mmol/L
MgCl₂；所述的氧化石墨烯濃度為80-100μg/mL，步驟(1)中所述的氧化石墨烯采用下述方法
制備：稱取2g石墨粉末溶于50mL濃硫酸中，攪拌2h，20℃條件下緩慢加入10g高錳酸鉀，然后
轉(zhuǎn)移至35℃水浴中強烈攪拌4h，加入600mL超純水稀釋反應(yīng)液；逐漸滴加20mL30％H₂O₂溶液，
將反應(yīng)混合物分別依次用0.1mol/L HCl和超純水洗滌5次，超聲分散1h，以5000rpm的速度
離心GO混合物10min，取上清液作為所述氧化石墨烯。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的生物檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)中所述的氧化石
墨烯濃度為100μg/mL，孵化時間T2為15-50min。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的生物檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)中的孵化時間T2
為20-30min。
14.根據(jù)權(quán)利要求12的所述生物檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)中的孵化時間T2
為25min。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的所述生物檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中的條件為FAM的
激發(fā)波長設(shè)定為492nm，掃描范圍505-600nm，掃描步長為1nm；Cy5的激發(fā)波長設(shè)定為640nm，
掃描范圍650-750nm，掃描步長為1nm；ROX的激發(fā)波長設(shè)定為580nm，掃描范圍590-700nm，掃
描步長為1nm。