本發明提供了一種用于檢測冬生疫霉的引物對和探針，所述引物對的核苷酸序列如SEQ ID No.1和2所示，所述探針的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。本發明進一步提供了檢測冬生疫霉的熒光RT-PCR法，其是以樣品總DNA為模板，利用上述引物對和探針進行實時熒光PCR擴增，每個循環結束采集數據，反應結束后根據擴增曲線判定結果。該方法可從發病植物組織及土壤中復雜的病原菌環境快速、準確地檢測出冬生疫霉。根據該方法構建的檢測試劑盒操作簡便，特異性好，靈敏度高，對冬生疫霉疫情的早期預警、疫區的病原監測以及進出口安全等方面具有重要意義。

1.用于檢測冬生疫霉的引物對和探針，其特征在于，
上游引物PH-F：5’-CGACTTGCCACCGGGA-3’，
下游引物PH-R：5’-AACGGTACTTCTCTTTGCTCGAA-3’；
所述探針為：5’-F1-TTCCACAACCAATTCCAT-Q1-3'，其中F1
為報告熒光基團，Q1為非熒光性的淬滅基團。
2.根據權利要求1所述的引物對和探針，其特征在于，所述探針
中F1為FAM，Q1為MGB。
3.檢測冬生疫霉的熒光RT-PCR法，其特征在于，以樣品DNA為
模板，采用權利要求1或2所述的引物對和探針進行熒光RT-PCR反應，
每個循環結束采集數據，反應結束后根據擴增曲線判定結果。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，25μL的反應體系
含有成分如下：樣品DNA?1μL，不含Mg²⁺的10×PCR反應緩沖液
2.5μL，25mM?MgCL₂2.0μL，2.5mM?dNTP?2.0μL，10μM引物PH-F
1μL，10μM引物PH-R?1μL，10μM探針1.5μL，5U/μL?Taq?DNA聚
合酶0.3μL，ddH₂O?13.7μL；其中，樣品DNA中DNA的量為
0.0005-50ng。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，反應程序為：95℃
3min；95℃10s，60℃30s，40個循環。
6.用于檢測冬生疫霉的試劑盒，其包括權利要求1或2所述的
引物對和探針。
7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包
括dNTPs、Taq?DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反應緩沖液中的一種或多種。
8.根據權利要求6或7所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒
還包括標準陽性模板。