1.用于多重熒光PCR反應高特異性擴增HLA-B*15:02等位基因的特異性引物探針組合，
其特征在于，包括以下引物和探針序列：
第一條上游引物Fp1:5’-GACCGGACCACACAGATCCC-3’
第一條下游引物Rp1:5’-ATGGGGAGTCGTGACCTG-3’
第一條探針probe1：5’-HEX-ACCTGCGCGGCTACTACAACC-BHQ2-3’；
第二條上游引物Fp2：5’-TGATGTGTAGGAGGAAGAGC-3’
第二條下游引物Rp2:5’-AACCATCAAGGCGATACATGTG-3’
第二條探針probe2：5’-Cy5-TGTGAGGATGCTTCCCA-BHQ2-3’
其中，HEX為6-carboxy-hexachlorofluorescein；Cy5為Cyanine5；BHQ2為Black Hole
Quencher-2。
2.一種檢測HLA-B*15:02等位基因的TaqMan探針實時熒光PCR方法，用于非疾病診斷目
的，主要包括以下環節：
(1)針對HLA-B*15:02等位基因的序列特點，設計特異性引物和探針，即權利要求1所述
的引物探針組合；并設計內參基因的引物和探針；
(2)獲得抽提的待測樣本基因組DNA；
(3)在同一個反應體系中，將待測樣本基因組DNA與所述引物探針組合以及內參基因的
引物和探針按照確定比例混合；
(4)通過Applied Biosystem 7500或者LightCycler System480進行實時定量熒光PCR
檢測，其中分別利用FAM通道、HEX/VIC通道和Cy5通道進行多熒光通道信號采集；
(5)分析判斷待測樣本是否攜帶HLA-B*15:02等位基因。
3.根據權利要求2所述的檢測HLA-B*15:02等位基因的TaqMan探針實時熒光PCR方法，
其特征在于,設計內參基因β-Actin引物和探針為：
上游引物Actin-F:5’-CAGCAGATGTGGATCAGCAAG-3’
下游引物Actin-R:5’-GCATTTGCGGTGGACGAT-3’
探針probe:5’-FAM-AGGAGTATGACGAGTCCGGCCCC–BHQ2-3’
其中，FAM為6-carboxyfluorescein。
4.根據權利要求3所述的檢測HLA-B*15:02等位基因的TaqMan探針實時熒光PCR方法，
其特征在于：使用Premix Ex Taq試劑盒(TaKaRa)進行擴增，所述反應體系以20μL計，則包
括：10μL Premix Ex Taq(2×)，HLA-B*15:02特異性第一條上游引物Fp1:50nM，第一條下游
引物Rp1:50nM，第一條特異性探針probe1:50nM，第二條上游引物Fp2:100nM，第二條下游引
物Rp2:100nM，第二條特異性探針probe2:50nM以及β-Actin基因特異性上游引物Fp:50nM，
下游引物Rp:50nM，探針probe:50nM；然后加入待測樣本基因組DNA約10ng，補充PCR等級的
水至終體積20μL；擴增程序為：95℃預變性30s；95℃5s～10sec，60℃34s～40sec，共計35～
40個循環。
5.根據權利要求4所述的檢測HLA-B*15:02等位基因的TaqMan探針實時熒光PCR方法，
其特征在于：目的基因和內參基因的特異性引物和探針在熒光PCR儀上加入同一管中進行
擴增，但是用三個通道進行熒光的采集；內參基因作為質控，必須出現熒光擴增曲線；在內
參基因觀察到擴增曲線的前提下，特異性探針必須同時擴增出具有設定熒光值的熒光曲
線，則判定待測樣本攜帶有HLA-B*15:02等位基因。
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